CFDA-SE (Synonyms: 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester) |
Catalog No.GC14056
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CFDA-SE, nombre completo diacetato de carboxiceína, Éster de Succinimidilo, con permeabilidad de la membrana celular, es un tinte fluorescente CFDA-SE ampliamente utilizado para el rastreo celular viable o la detección de proliferación celular.
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Cas No.: 150347-59-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
CFDA-SE, nombre completo diacetato de carboxiceína, Éster de Succinimidilo, con permeabilidad de la membrana celular, es un tinte fluorescente CFDA-SE ampliamente utilizado para el rastreo celular viable o la detección de proliferación celular[1]. La fluorescencia de las células marcadas con CFDA-SE era muy uniforme y estable, y la fluorescencia podía distribuirse uniformemente a las dos células de la progenie [2]. CFDA-SE puede ofrecer una fuerte fluorescencia verde, Ex=494 nm,Em=521nm.
En la línea celular eritroleucémica humana K562 y otras líneas celulares, aunque todas las células están marcadas con una intensidad de fluorescencia relativamente alta por CFDA-SE, la eficiencia del marcado es muy variable[3]. Las vesículas densas de electrones se ven a nivel ultraestructural en las células marcadas. El marcado vesicular discreto también se puede observar en monturas de células enteras vistas con microscopía de fluorescencia. Las células enteras conservan una buena etiqueta durante 6 semanas. El etiquetado CFDA-SE es relativamente fácil, no tóxico para las células y no radioactivo[4].
El análisis de proliferación de células linfocíticas in vitro mediante el método CFDA-SE es una opción confiable y práctica para la evaluación de las respuestas de linfocitos T mitogénicos en pacientes con EIP aún no clasificados para apuntar a otros análisis genéticos[5]. Cuando se detecta NM mediante citometría de flujo, se pueden adoptar células marcadas con CFDA-SE del canal de detección FL1, y también se puede utilizar microscopía de fluorescencia para observar las células marcadas con CFDA-SE sin teñir las células adyacentes [6].
Se ha informado que CFDA-SE es eficaz en el marcado de las células CD34+, las células CD34+ aisladas del hígado fetal o el timo se etiquetaron con CFDA-SE y se inyectaron en un timo humano injertado por vía subcutánea en los ratones RAG-2 / IL-2Rγ. De una a 4 semanas después, la etiqueta CFDA-SE se encontró no solo en las células T, sino también en CD123+/alto CD4+CD45RA+ pDC2, lo que indica que las células CD34+ pueden convertirse en pDC2 dentro de un timo. Además de pDC2, se encontraron células dendríticas marcadas con CFDA-SE con un fenotipo maduro, determinadas por los marcadores de superficie celular CD11c, CD83 y CD80, en el injerto de timo humano inyectado. pDC2 no se encontró en la periferia de ratones portadores de un injerto tímico humano, lo que indica que el pDC2 intratímico no pudo emigrar del timo[7]. En ratones C57BL/6, CFDA-SE, a 80 veces la concentración utilizada para el marcado in vitro, no era tóxico y se marcaba aleatoriamente aproximadamente el 15 % de los timocitos 24 horas después de la inyección. La tasa de rotación de los emigrantes tímicos etiquetados en los ganglios linfáticos fue del orden de 21 días. Por lo tanto, CFDA-SE puede servir como una herramienta poderosa en estudios de migración relativamente a largo plazo[8].
References:
[1]: Chen JC, Chang ML, et,al. A kinetic study of the murine mixed lymphocyte reaction by 5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester labeling. J Immunol Methods. 2003 Aug;279(1-2):123-33. doi: 10.1016/s0022-1759(03)00236-9. PMID: 12969553.
[2]: Lyons AB, Blake SJ, et,al. Flow cytometric analysis of cell division by dilution of CFSE and related dyes. Curr Protoc Cytom. 2013;Chapter 9:Unit9.11. doi: 10.1002/0471142956.cy0911s64. PMID: 23546777.
[3]: Wang XQ, Duan XM, et,al. Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester fluorescent dye for cell labeling. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2005 Jun;37(6):379-85. doi: 10.1111/j.1745-7270.2005.00051.x. PMID: 15944752.
[4]: Gruber HE, Leslie KP, et,al. Optimization of 5-(and-6)-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester for labeling human intervertebral disc cells in vitro. Biotech Histochem. 2000 May;75(3):118-23. doi: 10.3109/10520290009066489. PMID: 10950173.
[5]: Azarsiz E, Karaca N, et,al. In vitro T lymphocyte proliferation by carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester method is helpful in diagnosing and managing primary immunodeficiencies. J Clin Lab Anal. 2018 Jan;32(1):e22216. doi: 10.1002/jcla.22216. Epub 2017 Apr 6. PMID: 28383134; PMCID: PMC6816938.
[6]: Li X, Dancausse H, et,al. Labeling Schwann cells with CFSE-an in vitro and in vivo study. J Neurosci Methods. 2003 May 30;125(1-2):83-91. doi: 10.1016/s0165-0270(03)00044-x. PMID: 12763234.
[7]: Weijer K, Uittenbogaart CH, et,al. Intrathymic and extrathymic development of human plasmacytoid dendritic cell precursors in vivo. Blood. 2002 Apr 15;99(8):2752-9. doi: 10.1182/blood.v99.8.2752. PMID: 11929763.
[8]: Graziano M, St-Pierre Y, et,al. The fate of thymocytes labeled in vivo with CFSE. Exp Cell Res. 1998 Apr 10;240(1):75-85. doi: 10.1006/excr.1997.3900. PMID: 9570923.
Protocolo para el etiquetado y conteo celular con CFDA-SE [1]:
Las células se contaron y teñiron con CFDA-SE, de la siguiente manera:
1.La solución de stock de 10 mm de CFDA-SE (Molecular Probes) se preparó en DMSO y las alícuotas se almacenaron a -20°C en presencia de un desecante.
2.Las células recolectadas se lavaron en HBSS y FBS al 1%, se resuspendieron a 20 × 106/mL de HBSS con FBS al 1 % y se tiñeron en una dilución de stock de 1/2000 de CFDA-SE en HBSS para lograr una concentración final de 2,5 μM (las células se mezclaron a CFDA-SE 1:1 v/v). El procedimiento se llevó a cabo a temperatura ambiente en la oscuridad.
3.Al final del período de incubación (8 min), la reacción se detuvo añadiendo un volumen igual de FBS. Las células se granularon suavemente a 300 g durante 10 minutos y se lavaron (400 g durante 10 minutos) dos veces en medio de cultivo
4.Las células se platearon y al día siguiente se realizó la primera adquisición citométrica de flujo (punto de tiempo 1). En poblaciones que muestran una tasa de proliferación particularmente alta, dos o más generaciones de células ya podrían ser evidentes en este punto. Sin embargo, el análisis en los puntos de tiempo posteriores se llevó a cabo comparando la distribución de la mancha con la descrita en el momento 1. Se excluyeron las células muertas y el análisis de los archivos de adquisición se realizó por separado en las dos subpoblaciones.
Este protocolo solo proporciona una guía y debe modificarse de acuerdo con sus necesidades específicas.
Experimento celular [1]:
Líneas celulares
Línea celular eritroleucémica humana K562, línea celular de linfoma de ratón YAC-1, línea celular de cáncer de mama humano MCF-7 y línea celular de melanoma humano A375
Método de preparación
El stock de CFDA-SE de 5 mM en DMSO se diluyó a diferentes concentraciones (2 μM, 3 μM, 4 μM, 5 μM, 10 μM y 20 μM) en PBS con un volumen total de 1 ml. Se agregaron células a un volumen igual de CFDA-SE con diferentes concentraciones y se incubaron a 37 C durante 5, 6, 7, 8, 10 y 15 minutos con agitación.
Condiciones de reacción
1, 1,5, 2, 2,5, 5 y 10 µM CFDA-SE
Aplicaciones
CFDA-SE a 2,5 μM tiñó más del 95 % de las células en todas las líneas celulares probadas, y aumentó de forma dependiente de la dosis la intensidad de fluorescencia de las células teñidas. Se encontró que la concentración óptima para K562 y YAC-1 era de 2,5 μM, mientras que las concentraciones óptimas para A375 y MCF-7 eran de 5 μM y 10 μM, respectivamente. Dentro del período experimental de 6 horas, no se observó citotoxicidad relacionada con CFDA-SE.
Experimento con animales [2]:
Modelos animales
Ratones C57BL/6, de 5 a 8 semanas
Método de preparación
Se inyectó CFDA-SE en el lóbulo tímico
Formulario de dosificación
La concentración de CFDA-SE es de 10 μM
Aplicaciones
CFDA-SE, a 80 veces la concentración utilizada para el etiquetado in vitro, no era tóxico y se etiquetaba aleatoriamente aproximadamente el 15 % de los timocitos 24 horas después de la inyección. La tasa de rotación de los emigrantes tímicos etiquetados en los ganglios linfáticos fue del orden de 21 días. Por lo tanto, CFDA-SE puede servir como una herramienta poderosa en estudios de migración relativamente a largo plazo.
References:
[1]: Wang XQ, Duan XM,et,al. Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester fluorescent dye for cell labeling. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2005 Jun;37(6):379-85. doi: 10.1111/j.1745-7270.2005.00051.x. PMID: 15944752.
[2]: Graziano M, St-Pierre Y, et,al. The fate of thymocytes labeled in vivo with CFSE. Exp Cell Res. 1998 Apr 10;240(1):75-85. doi: 10.1006/excr.1997.3900. PMID: 9570923.
| Cas No. | 150347-59-4 | SDF | |
| Sinónimos | 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester | ||
| Chemical Name | 5-(((2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy)carbonyl)-3-oxo-3H-spiro[isobenzofuran-1,9'-xanthene]-3',6'-diyl diacetate | ||
| Canonical SMILES | O=C1N(OC(C2=CC=C(C3(C(C=CC(OC(C)=O)=C4)=C4OC5=C3C=CC(OC(C)=O)=C5)OC6=O)C6=C2)=O)C(CC1)=O | ||
| Formula | C29H19NO11 | M.Wt | 557.46 |
| Solubility | ≥ 37.2mg/mL in DMSO with ultrasonic | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.7939 mL | 8.9693 mL | 17.9385 mL |
| 5 mM | 358.8 μL | 1.7939 mL | 3.5877 mL |
| 10 mM | 179.4 μL | 896.9 μL | 1.7939 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
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