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CFDA-SE

Catalog No.: GC14056Purity:>95.00%Synonyms: 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester
COASDSData Sheet
CFDA-SE(vollständiger Name: carboxycein diacetate, Succinimidyl Ester) ist ein fluoreszierender Farbstoff mit Zellmembran-Gängigkeit. Es wird weitgehend zur Verfolgung lebender Zellen oder zur Bestimmung der Zellproliferation verwendet.

Die Produkte sind ausschließlich für Forschungszwecke bestimmt. Nicht zur Anwendung am Menschen. Wir verkaufen nicht an Patienten.

CFDA-SE
Cas No.: 150347-59-4
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Beschreibung (Description)

CFDA-SE(vollständiger Name: carboxycein diacetate, Succinimidyl Ester) ist ein fluoreszierender Farbstoff mit Zellmembran-Gängigkeit. Es wird weitgehend zur Verfolgung lebender Zellen oder zur Bestimmung der Zellproliferation verwendet[1]. Die Fluoreszenz von CFDA-SE-markierten Zellen ist sehr gleichmäßig und stabil. Die Fluoreszenz verteilt sich gleichmäßig auf die beiden Tochterzellen[2]. CFDA-SE erzeugt starke grüne Fluoreszenz(Ex=494 nm,Em=521nm).

In der menschlichen erythroleukaemischen Zelllinie K562 und anderen Zelllinien werden alle Zellen mit relativ hoher Fluoreszenz-Intensität markiert. Die Markierungseffizienz ist sehr variabel[3]. Elektronendichte Vesikel sind auf ultrastruktureller Ebene in markierten Zellen sichtbar. Diskrete vesikuläre Markierung kann auch in ganzen Zellpräparaten unter dem Fluoreszenzmikroskop beobachtet werden. Ganze Zellen behalten die Markierung über 6 Wochen bei. Die CFDA-SE-Markierung ist relativ einfach, ungiftig für Zellen und nicht-radioaktiv[4].

Die In-vitro-Analyse der Lymphozyten-Proliferation mittels CFDA-SE ist eine zuverlässige und praktische Methode. Sie dient zur Beurteilung der mitogenen T-Lymphozyten-Antworten bei noch unklassifizierten PID-Patienten für weitere genetische Analysen[5]. Bei der Durchflusszytometrie-Nachweisung von NM kann der FL1-Detektionskanal für CFDA-SE-markierte Zellen verwendet werden. CFDA-SE-markierte Zellen lassen sich auch unter dem Fluoreszenzmikroskop beobachten, ohne benachbarte Zellen zu färben[6].

Die Wirksamkeit von CFDA-SE zur Markierung von CD34+-Zellen wurde berichtet. Aus fötaler Leber oder Thymus isolierte CD34+-Zellen wurden mit CFDA-SE markiert und in ein subkutan in RAG-2 / IL-2Rγ /-Mäusen transplantiertes menschliches Thymusgewebe injiziert. Ein bis 4 Wochen später fand sich die CFDA-SE-Markierung nicht nur in T-Zellen, sondern auch in CD123+/hoch CD4+CD45RA+ pDC2. Das zeigt, dass CD34+-Zellen sich im Thymus zu pDC2 entwickeln können. Neben pDC2 wurden CFDA-SE-markierte dendritische Zellen mit reifem Phänotyp im injizierten menschlichen Thymustransplantat gefunden. Sie wurden anhand der Oberflächenmarker CD11c, CD83 und CD80 bestimmt. pDC2 wurde nicht in der Peripherie von Mäusen mit menschlichem Thymustransplantat gefunden. Das bedeutet, dass intrathymische pDC2 nicht aus dem Thymus auswanderte[7]. In C57BL/6-Mäusen war CFDA-SE in der 80-fachen Konzentration zur In-vitro-Markierung ungiftig. 24 Stunden nach der Injektion waren zufällig etwa 15% der Thymozyten markiert. Die Umsatzrate markierter Thymuswanderer in den Lymphknoten betrug circa 21 Tage. Daher kann CFDA-SE als leistungsfähiges Werkzeug für relativ langfristige Migrationsstudien dienen[8].

References:
[1]: Chen JC, Chang ML, et,al. A kinetic study of the murine mixed lymphocyte reaction by 5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester labeling. J Immunol Methods. 2003 Aug;279(1-2):123-33. doi: 10.1016/s0022-1759(03)00236-9. PMID: 12969553.
[2]: Lyons AB, Blake SJ, et,al. Flow cytometric analysis of cell division by dilution of CFSE and related dyes. Curr Protoc Cytom. 2013;Chapter 9:Unit9.11. doi: 10.1002/0471142956.cy0911s64. PMID: 23546777.
[3]: Wang XQ, Duan XM, et,al. Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester fluorescent dye for cell labeling. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2005 Jun;37(6):379-85. doi: 10.1111/j.1745-7270.2005.00051.x. PMID: 15944752.
[4]: Gruber HE, Leslie KP, et,al. Optimization of 5-(and-6)-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester for labeling human intervertebral disc cells in vitro. Biotech Histochem. 2000 May;75(3):118-23. doi: 10.3109/10520290009066489. PMID: 10950173.
[5]: Azarsiz E, Karaca N, et,al. In vitro T lymphocyte proliferation by carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester method is helpful in diagnosing and managing primary immunodeficiencies. J Clin Lab Anal. 2018 Jan;32(1):e22216. doi: 10.1002/jcla.22216. Epub 2017 Apr 6. PMID: 28383134; PMCID: PMC6816938.
[6]: Li X, Dancausse H, et,al. Labeling Schwann cells with CFSE-an in vitro and in vivo study. J Neurosci Methods. 2003 May 30;125(1-2):83-91. doi: 10.1016/s0165-0270(03)00044-x. PMID: 12763234.
[7]: Weijer K, Uittenbogaart CH, et,al. Intrathymic and extrathymic development of human plasmacytoid dendritic cell precursors in vivo. Blood. 2002 Apr 15;99(8):2752-9. doi: 10.1182/blood.v99.8.2752. PMID: 11929763.
[8]: Graziano M, St-Pierre Y, et,al. The fate of thymocytes labeled in vivo with CFSE. Exp Cell Res. 1998 Apr 10;240(1):75-85. doi: 10.1006/excr.1997.3900. PMID: 9570923.

Protokoll (Protocol)

Protokoll zur Zellmarkierung un -zählung mit CFDA-SE [1]:

Die Zellen wurden gezählt und mit CFDA-SE gefärbt:
1.Eine 10 mm Stammlösung von CFDA-SE(Molecular Probes) wurde in DMSO hergestellt und in Aliquots bei -20°C mit einem Trocknungsmittel gelagert.
2.Die geernteten Zellen wurden in HBSS mit 1% FBS gewachen, in 20 × 106/mL HBSS mit 1% FBS resuspendiert und in einer 1:2000 Verdünnung der CFDA-SE-Stammlösung in HBSS gefärbt, um eine Endkonzentration von 2.5 μM zu erreichen(Zellen wurden 1:1 v/v mit CFDA-SE gemischt). Die Inkubation erfolgte bei Raumtemperatur im Dunkel.
3.Nach 8 Minuten Inkubation wurde die Reaktion durch Zugabe des gleichen Volumens FBS gestoppt. Die Zellen wurden 10 Minuten lang bei 300 g shonend pelletiert und zweimal in Kulturmedium gewaschen(10 Minuten bei 400 g).
4.Dann wurden die Zellen ausgesät umd am Tag nach der ersten durchflusszytometrischen Messung(Zeitpunkt 1) analysiert. Bei Populationen mit besonders hoher Proliferationsrate können zu diesem Zeitpunkt zwei oder mehr Zellgeneration sichtbar sein. Aber die Analyse zu den nachfolgenden Zeitpunkten erfolgte durch Vergleich der Färbeverteilung mit der zu Zeitpunkt 1 beschriebenen. Tote Zellen wurden ausgeschlossen und die Analyse der Messdateien für die beiden Subpopulationen wurde separat durchgeführt.
Das Protokoll dient nur als Richtlinie und sollte an Ihre spezifsichen Bedürfnisse angepasst werden.

References:
[1]. Urbani S, Caporale R,et,al. Use of CFDA-SE for evaluating the in vitro proliferation pattern of human mesenchymal stem cells. Cytotherapy. 2006;8(3):243-53. doi: 10.1080/14653240600735834. PMID: 16793733.

Zellexperiment [1]:

Zelllinien

Die humane erythroleukaemische Zelllinie K562, die Maus-Lymphomzelllinie YAC-1, die humane Brustkrebszelllinie MCF-7 und die humane Melanomzelllinie A375

Vorbereitungsmethode

Die 5 mM CFDA-SE-Stammlösung in DMSO wurde in PBS auf verschiedene Konzentrationen(2 μM, 3 μM, 4 μM, 5 μM, 10 μM und 20 μM) mit einem Gesamtvolumen von 1 ml verdünnt. Zellen wurden zu gleichen Volumen der verscheidenen CFDA-SE-Konzentrationen gegeben und unter Schütteln 5, 6, 7, 8, 10 und 15 Minuten bei 37 C inkubiert.

Reaktionsbedingungen

1, 1.5, 2, 2.5, 5 und 10 µM CFDA-SE

Anwendungen

CFDA-SE(2.5 μM) färbte über 95% der Zellen aller getesteten Zelllinien an und erhöhte die Fluoreszenzintensität der angefärbten Zellen dosisabhängig. Die optimale Konzentration für K562 und YAC-1 lag bei 2.5 μM, während die optimalen Konzentrationen für A375 und MCF-7 5 μM bzw. 10 μM betrugen. Innerhalb des 6-stündigen Versuchszeitraums wurde keine Zytotoxizität im Zusammenhang mit CFDA-SE beobachtet.

Tierversuch [2]:

Tiermodelle

C57BL/6-Mäuse, im Alter von 5-8 Wochen

Vorbereitungsmethode

CFDA-SE wurde in den Thymuslappen injiziert.

Dosierungsform

Die Konzentration von CFDA-SE ist 10 μM.

Anwendungen

CFDA-SE, in der 80-fachen Konzentration der für die In-vitro-Markierung verwendeten, war nicht toxisch und markierte 24 Stunden nach der Injektion zufällig etwa 15% der Thymozyten. Die Umsatzrate der markierten Thymus-Emigranten in den Lymphknoten lag bei circa 21 Tagen. Daher kann CFDA-SE als wertvolles Werkzeug für Migrationsstudien mit relativ langer Dauer dienen.

References:
[1]: Wang XQ, Duan XM,et,al. Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester fluorescent dye for cell labeling. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2005 Jun;37(6):379-85. doi: 10.1111/j.1745-7270.2005.00051.x. PMID: 15944752.
[2]: Graziano M, St-Pierre Y, et,al. The fate of thymocytes labeled in vivo with CFSE. Exp Cell Res. 1998 Apr 10;240(1):75-85. doi: 10.1006/excr.1997.3900. PMID: 9570923.

Produktdokumente (Product Documents)

Purity:>95.00%Appearance:A solid
COASDSData Sheet

Biologische Daten (Biological Data)

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Chemische Eigenschaften (Chemical Properties)

CAS-Nr.
150347-59-4
Synonyme
5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester
Chemischer Name
5-(((2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy)carbonyl)-3-oxo-3H-spiro[isobenzofuran-1,9'-xanthene]-3',6'-diyl diacetate
SMILES
O=C1N(OC(C2=CC=C(C3(C(C=CC(OC(C)=O)=C4)=C4OC5=C3C=CC(OC(C)=O)=C5)OC6=O)C6=C2)=O)C(CC1)=O
Summenformel
C29H19NO11
Molekulargewicht
557.46
Löslichkeit
≥ 37.2mg/mL in DMSO with ultrasonic
Lagerung
Store at -20°C, protect from light
Allgemeine Hinweise
Wählen Sie anhand der Löslichkeitsdaten des Produkts ein geeignetes Lösungsmittel. Aliquotieren Sie die Stammlösung nach der Herstellung, um wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen zu vermeiden.
Verwenden Sie Stammlösungen bei Lagerung bei -80°C innerhalb von 6 Monaten bzw. bei -20°C innerhalb von 1 Monat.
Zur Verbesserung der Löslichkeit das Röhrchen auf 37°C erwärmen und für eine angemessene Dauer beschallen.
Versandbedingungen
Evaluierungsmuster werden mit Kühlakkus versandt. Andere verfügbare Größen werden bei Raumtemperatur oder auf Anfrage mit Kühlakkus versandt.

Rechner (Calculators)Molarität / Verdünnung / Molekulargewicht / Einheitenumrechnung / In-vivo-Formulierung / Löslichkeit

g/mol

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