CFDA-SE (Synonyms: 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester) |
Katalog-Nr.GC14056
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CFDA-SE(vollständiger Name: carboxycein diacetate, Succinimidyl Ester) ist ein fluoreszierender Farbstoff mit Zellmembran-Gängigkeit. Es wird weitgehend zur Verfolgung lebender Zellen oder zur Bestimmung der Zellproliferation verwendet.
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Cas No.: 150347-59-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
CFDA-SE(vollständiger Name: carboxycein diacetate, Succinimidyl Ester) ist ein fluoreszierender Farbstoff mit Zellmembran-Gängigkeit. Es wird weitgehend zur Verfolgung lebender Zellen oder zur Bestimmung der Zellproliferation verwendet[1]. Die Fluoreszenz von CFDA-SE-markierten Zellen ist sehr gleichmäßig und stabil. Die Fluoreszenz verteilt sich gleichmäßig auf die beiden Tochterzellen[2]. CFDA-SE erzeugt starke grüne Fluoreszenz(Ex=494 nm,Em=521nm).
In der menschlichen erythroleukaemischen Zelllinie K562 und anderen Zelllinien werden alle Zellen mit relativ hoher Fluoreszenz-Intensität markiert. Die Markierungseffizienz ist sehr variabel[3]. Elektronendichte Vesikel sind auf ultrastruktureller Ebene in markierten Zellen sichtbar. Diskrete vesikuläre Markierung kann auch in ganzen Zellpräparaten unter dem Fluoreszenzmikroskop beobachtet werden. Ganze Zellen behalten die Markierung über 6 Wochen bei. Die CFDA-SE-Markierung ist relativ einfach, ungiftig für Zellen und nicht-radioaktiv[4].
Die In-vitro-Analyse der Lymphozyten-Proliferation mittels CFDA-SE ist eine zuverlässige und praktische Methode. Sie dient zur Beurteilung der mitogenen T-Lymphozyten-Antworten bei noch unklassifizierten PID-Patienten für weitere genetische Analysen[5]. Bei der Durchflusszytometrie-Nachweisung von NM kann der FL1-Detektionskanal für CFDA-SE-markierte Zellen verwendet werden. CFDA-SE-markierte Zellen lassen sich auch unter dem Fluoreszenzmikroskop beobachten, ohne benachbarte Zellen zu färben[6].
Die Wirksamkeit von CFDA-SE zur Markierung von CD34+-Zellen wurde berichtet. Aus fötaler Leber oder Thymus isolierte CD34+-Zellen wurden mit CFDA-SE markiert und in ein subkutan in RAG-2 / IL-2Rγ /-Mäusen transplantiertes menschliches Thymusgewebe injiziert. Ein bis 4 Wochen später fand sich die CFDA-SE-Markierung nicht nur in T-Zellen, sondern auch in CD123+/hoch CD4+CD45RA+ pDC2. Das zeigt, dass CD34+-Zellen sich im Thymus zu pDC2 entwickeln können. Neben pDC2 wurden CFDA-SE-markierte dendritische Zellen mit reifem Phänotyp im injizierten menschlichen Thymustransplantat gefunden. Sie wurden anhand der Oberflächenmarker CD11c, CD83 und CD80 bestimmt. pDC2 wurde nicht in der Peripherie von Mäusen mit menschlichem Thymustransplantat gefunden. Das bedeutet, dass intrathymische pDC2 nicht aus dem Thymus auswanderte[7]. In C57BL/6-Mäusen war CFDA-SE in der 80-fachen Konzentration zur In-vitro-Markierung ungiftig. 24 Stunden nach der Injektion waren zufällig etwa 15% der Thymozyten markiert. Die Umsatzrate markierter Thymuswanderer in den Lymphknoten betrug circa 21 Tage. Daher kann CFDA-SE als leistungsfähiges Werkzeug für relativ langfristige Migrationsstudien dienen[8].
References:
[1]: Chen JC, Chang ML, et,al. A kinetic study of the murine mixed lymphocyte reaction by 5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester labeling. J Immunol Methods. 2003 Aug;279(1-2):123-33. doi: 10.1016/s0022-1759(03)00236-9. PMID: 12969553.
[2]: Lyons AB, Blake SJ, et,al. Flow cytometric analysis of cell division by dilution of CFSE and related dyes. Curr Protoc Cytom. 2013;Chapter 9:Unit9.11. doi: 10.1002/0471142956.cy0911s64. PMID: 23546777.
[3]: Wang XQ, Duan XM, et,al. Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester fluorescent dye for cell labeling. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2005 Jun;37(6):379-85. doi: 10.1111/j.1745-7270.2005.00051.x. PMID: 15944752.
[4]: Gruber HE, Leslie KP, et,al. Optimization of 5-(and-6)-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester for labeling human intervertebral disc cells in vitro. Biotech Histochem. 2000 May;75(3):118-23. doi: 10.3109/10520290009066489. PMID: 10950173.
[5]: Azarsiz E, Karaca N, et,al. In vitro T lymphocyte proliferation by carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester method is helpful in diagnosing and managing primary immunodeficiencies. J Clin Lab Anal. 2018 Jan;32(1):e22216. doi: 10.1002/jcla.22216. Epub 2017 Apr 6. PMID: 28383134; PMCID: PMC6816938.
[6]: Li X, Dancausse H, et,al. Labeling Schwann cells with CFSE-an in vitro and in vivo study. J Neurosci Methods. 2003 May 30;125(1-2):83-91. doi: 10.1016/s0165-0270(03)00044-x. PMID: 12763234.
[7]: Weijer K, Uittenbogaart CH, et,al. Intrathymic and extrathymic development of human plasmacytoid dendritic cell precursors in vivo. Blood. 2002 Apr 15;99(8):2752-9. doi: 10.1182/blood.v99.8.2752. PMID: 11929763.
[8]: Graziano M, St-Pierre Y, et,al. The fate of thymocytes labeled in vivo with CFSE. Exp Cell Res. 1998 Apr 10;240(1):75-85. doi: 10.1006/excr.1997.3900. PMID: 9570923.
Protokoll zur Zellmarkierung un -zählung mit CFDA-SE [1]: | |
Die Zellen wurden gezählt und mit CFDA-SE gefärbt: | |
References: | |
| Zellexperiment [1]: | |
Zelllinien | Die humane erythroleukaemische Zelllinie K562, die Maus-Lymphomzelllinie YAC-1, die humane Brustkrebszelllinie MCF-7 und die humane Melanomzelllinie A375 |
Vorbereitungsmethode | Die 5 mM CFDA-SE-Stammlösung in DMSO wurde in PBS auf verschiedene Konzentrationen(2 μM, 3 μM, 4 μM, 5 μM, 10 μM und 20 μM) mit einem Gesamtvolumen von 1 ml verdünnt. Zellen wurden zu gleichen Volumen der verscheidenen CFDA-SE-Konzentrationen gegeben und unter Schütteln 5, 6, 7, 8, 10 und 15 Minuten bei 37 C inkubiert. |
Reaktionsbedingungen | 1, 1.5, 2, 2.5, 5 und 10 µM CFDA-SE |
Anwendungen | CFDA-SE(2.5 μM) färbte über 95% der Zellen aller getesteten Zelllinien an und erhöhte die Fluoreszenzintensität der angefärbten Zellen dosisabhängig. Die optimale Konzentration für K562 und YAC-1 lag bei 2.5 μM, während die optimalen Konzentrationen für A375 und MCF-7 5 μM bzw. 10 μM betrugen. Innerhalb des 6-stündigen Versuchszeitraums wurde keine Zytotoxizität im Zusammenhang mit CFDA-SE beobachtet. |
| Tierversuch [2]: | |
Tiermodelle | C57BL/6-Mäuse, im Alter von 5-8 Wochen |
Vorbereitungsmethode | CFDA-SE wurde in den Thymuslappen injiziert. |
Dosierungsform | Die Konzentration von CFDA-SE ist 10 μM. |
Anwendungen | CFDA-SE, in der 80-fachen Konzentration der für die In-vitro-Markierung verwendeten, war nicht toxisch und markierte 24 Stunden nach der Injektion zufällig etwa 15% der Thymozyten. Die Umsatzrate der markierten Thymus-Emigranten in den Lymphknoten lag bei circa 21 Tagen. Daher kann CFDA-SE als wertvolles Werkzeug für Migrationsstudien mit relativ langer Dauer dienen. |
References: | |
| Cas No. | 150347-59-4 | SDF | |
| Überlieferungen | 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester | ||
| Chemical Name | 5-(((2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy)carbonyl)-3-oxo-3H-spiro[isobenzofuran-1,9'-xanthene]-3',6'-diyl diacetate | ||
| Canonical SMILES | O=C1N(OC(C2=CC=C(C3(C(C=CC(OC(C)=O)=C4)=C4OC5=C3C=CC(OC(C)=O)=C5)OC6=O)C6=C2)=O)C(CC1)=O | ||
| Formula | C29H19NO11 | M.Wt | 557.46 |
| Löslichkeit | ≥ 37.2mg/mL in DMSO with ultrasonic | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.7939 mL | 8.9693 mL | 17.9385 mL |
| 5 mM | 358.8 μL | 1.7939 mL | 3.5877 mL |
| 10 mM | 179.4 μL | 896.9 μL | 1.7939 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >95.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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