CFDA-SE (Synonyms: 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester) |
カタログ番号GC14056
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CFDA-SEは、細胞内細胞骨格タンパク質の遊離アミン基と不可逆的な共有結合を形成し、加水分解により緑色の蛍光を発する細胞透過性蛍光色素である。
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Cas No.: 150347-59-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
CFDA-SEは、細胞内細胞骨格タンパク質の遊離アミン基と不可逆的な共有結合を形成し、加水分解により緑色の蛍光を発する細胞透過性蛍光色素である。CFDA-SEの蛍光は細胞分裂の際に娘細胞に均一に分配され、分裂ごとに蛍光強度が半減し、その減衰は細胞分裂回数に比例する。CFDA-SEは、励起波長488 nm、発光波長518 nmで検出可能であり、細胞増殖アッセイや生細胞追跡に広く用いられている。
1. 染色液の調製
(1) 原液の調製：CFDA-SEをDMSOに溶解して原液を調製する。濃度は通常10mMとする。原液は分注し、光を避けて-20°Cまたは-80°Cで保存することを推奨する。凍結融解を繰り返さないようにする。
(2) 使用液の調製：ストック溶液を無血清培地またはPBSで希釈し、1～10μMの使用液を調製する。CFDA-SEは水溶液中で急速に加水分解するため、使用直前に使用液を調製する。血清や培養液中に存在するタンパク質は、CFDA-SEとの結合を競合し、標識効率を著しく低下させる。作業用溶液の調製および標識プロセスは、無血清条件下で厳密に行う必要がある。
2. 懸濁細胞の染色
(1) 細胞の回収：4℃で1000×g、3～5分間遠心分離し、上清を廃棄した後、あらかじめ温めた（37℃）無血清PBSで、各5分間ずつ2回洗浄する。
(2) 細胞密度の調整：細胞を無血清PBSに再懸濁し、密度を1×106～1×107細胞/mLに調整する。
(3) 染色：CFDA-SE作業溶液を加え（最終濃度が作業濃度になるように注意）、素早くかつ穏やかに混合する。
(4) インキュベーション：細胞懸濁液を37℃の暗所で10～30分間インキュベートする。最適なインキュベーション時間は細胞の種類によって異なり、具体的な実験要件に基づいて経験的に決定する必要がある。
(5) 洗浄および再懸濁：インキュベーション後、1000×gで5分間遠心分離し、上清を廃棄する。その後、PBSを用いて2回、各5分間洗浄し、残留する遊離色素を除去する。
3. 付着細胞の染色（懸濁液標識法：Suspension Labeling Method）
(1) 細胞の回収：培養液を除去し、PBSで2回洗浄した後、トリプシンを用いて細胞を剥離する。消化後、1000×gで3～5分間遠心分離する。
(2) 「浮遊細胞の染色」の(2)から(5)の手順に従う。
4. 付着細胞の染色（In Situ 標識法）
(1) 播種：細胞が約60～80％のコンフルエンスに達するまでプレート上で培養する。
(2) 洗浄：古い培地を除去し、あらかじめ温めておいた無血清PBSで2回洗浄する。
(3) インキュベーション：実験要件に従い、細胞がちょうど覆われる程度のCFDA-SE原液を加える。37℃の暗所で10～30分間インキュベートする。最適なインキュベーション時間は細胞の種類によって異なるため、実験的に決定する必要がある。
(4) 洗浄：染色液を吸引除去し、PBSで2回洗浄する。
5. 検出
実験目的に応じて、必要であれば細胞を剥離し、蛍光顕微鏡下で観察するか、または Ex/Em 488/518 nm でフローサイトメトリーによる測定を行う。
注記：
(1) 細胞内エステラーゼ活性は細胞の種類によって異なり、これにより染色効率に差が生じる場合がある。
(2) 蛍光色素は光退色しやすい。染色手順全体を通じて、光から保護する。
| Cas No. | 150347-59-4 | SDF | |
| 同義語 | 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester | ||
| Chemical Name | 5-(((2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy)carbonyl)-3-oxo-3H-spiro[isobenzofuran-1,9'-xanthene]-3',6'-diyl diacetate | ||
| Canonical SMILES | O=C1N(OC(C2=CC=C(C3(C(C=CC(OC(C)=O)=C4)=C4OC5=C3C=CC(OC(C)=O)=C5)OC6=O)C6=C2)=O)C(CC1)=O | ||
| Formula | C29H19NO11 | M.Wt | 557.46 |
| 溶解度 | ≥ 37.2mg/mL in DMSO with ultrasonic | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.7939 mL | 8.9693 mL | 17.9385 mL |
| 5 mM | 358.8 μL | 1.7939 mL | 3.5877 mL |
| 10 mM | 179.4 μL | 896.9 μL | 1.7939 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >95.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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