Sumatriptan

Líneas celulares

Método de preparación

HEK 293,un línea celular embrionaria de riñón transformada en humanos,fue cultivada en el medio de Dulbecco's modi®ed Eagle's que contenía 1 mM de piruvato sódico,2 mM L-glutamina,antibióticas y un 10% de suero fetal.El medio de selección y cultivo para las células HEK 293 que expresan el receptor 5-HT 1B contenía una genética adiconal de 800μg/ml.La genéyica se dejó al menos 2 días antes del ensayo.Las células se cultivaron a 37ºC en aire humidi®ed aire con 5% CO₂.Las células se colocaron en placas de 24 pozos multi.Al día siguiente,las células se lavaron e incubaron durante 20 minutos en presencia de 10pM-10μM Sumatriptan con solución salina controlada (composición en mM: NaCl=120, KCl=5, MgCl₂=0.8, CaCl₂=1.8, glucose=15 y phenol red=0.04 en 25mM Tris-HCl, pH 7.4)que contenían 100μM forskolina o disolvente.La incubaión se detuvo con HCIO4 helado.El extracto se neutralizó a pH 7,5 con solución de K₃PO₄/KOH.Tras la precipitación de f KClO₄ a 4℃,se centrifugaron las placas y el sobrenadante se anlizó para obtener contenido cíclico de AMP con un kit comercial de radioinmunoensayol [ 125 I]Amp cíclico estimulado por forskolina (fijado en 100%) y se representaron graficamente en función de la concentración del f´ármaco en un escala logarítima.Las curvas sigmoides de mejor ®t se calcularon mediante un análisis de regresión no lineal.El valor pIC₅₀ se refería a la concentración de un compuesto que produce la mitad de la reducción máxima en AMP cíclico observada con el 5-HT.

Condiciones de reacción

Áreas de aplicación

Modelos animales

Método de preparación

Todos los experimentos se realizaron con ratones machos C57BL/6 que pesaban entre 20 y 30g.Los animales se alojaron en un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas.Los experimentos se realizaron entre las 9:00 y las 14:00 horas a una temperatura de 22ºC.Un stock de 5,0 mg/ml de NTG disuelto en alcohol al 30%,propilenglicol al 30% y agua se diluía cada día en suero salino al 0,9% en un tubo de polipropileno.Se administraron dosis intraperitoneales de 0.5, 1, 5 o 10mg/kgLos ratones control recib ieron una inyección intraperitoneal de 0,9% de solución salina.Cinco minutos después de la administración de 10 mg/kg de NTG,cada animal fue tratado con i.p.Sumatriptan(600μg/kg) o solución salina.Alternativamente,un conjunto idéntico de los ratones inyectados con NYG fue tratado con una única inyección de Sumatriptan intratecal (0.06μg in 5μl) o solución salina a los 5 minutos posteriores a la administración de NTG.Los animales se acostumbraron al aparato de prueba durante 60 minutos el día anterior y de nuevo inmediatamente antes de determinar los umbrales iniciales de nociceptividad.Cada grupo de animales se sometió a una de dos pruebas diferentes antes y después de la inyección de NTG.Se utilizó el ensayo de Hargreves para determinar los umbrales nocicepticos témicos.Se determinaron umbrales nociceptivos mecánicos con monofilamentos de von Frey.

Forma de dosificación

Áreas de aplicación

References:
[1] Lesage AS, Wouters R, Van Gompel P, et al. Agonistic properties of alniditan, sumatriptan and dihydroergotamine on human 5-HT1B and 5-HT1D receptors expressed in various mammalian cell lines. Br J Pharmacol. 1998;123(8):1655-1665.
[2] Bates EA, Nikai T, Brennan KC, et al. Sumatriptan alleviates nitroglycerin-induced mechanical and thermal allodynia in mice. Cephalalgia. 2010;30(2):170-178.