DDAO |
Catalog No.GC61840
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DDAO est une sonde fluorescente rouge proche - infrarouge (NIR) que la longeur d'onde d'excitation réglable est (600-650nm) et la longueur d'onde d'émission longue est (λem=656nm) et pKa (~5) est relativement plus bas.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 118290-05-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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DDAO est une sonde fluorescente rouge proche - infrarouge (NIR) que la longeur d'onde d'excitation réglable est (600-650nm) et la longueur d'onde d'émission longue est (λem=656nm) et pKa (~5) est relativement plus bas[1]. DDAO peut être utilisé pour détecter l'activité de différentes enzymes, comme β-galactosidase, sulfatase, protéine phosphatase 2A, carboxylestérase 2, l'albumine humaine, et l'estérase. Il y a une relation linéaire entre la concentration de protéine phosphatase 2A (pp-2A) et la flurescence DDAO-induite[2]. DDAO peut être utilisé pour rechercher la phagocytose des macrophages pour les cellules cancéreuses[3]. DDAO peut être utilisé dans la recherche de la prolifération des cellules B[4].
References:
[1] Hou J, Qian M, Zhao H, et al. A near-infrared ratiometric/turn-on fluorescent probe for in vivo imaging of hydrogen peroxide in a murine model of acute inflammation[J]. Analytica Chimica Acta, 2018, 1024: 169-176.
[2] Leira F, Vieites J M, Vieytes M R, et al. Characterization of 9H-(1, 3-dichlor-9, 9-dimethylacridin-2-ona-7-yl)-phosphate (DDAO) as substrate of PP-2A in a fluorimetric microplate assay for diarrhetic shellfish toxins (DSP)[J]. Toxicon, 2000, 38(12): 1833-1844.
[3] Candas-Green D, Xie B, Huang J, et al. Dual blockade of CD47 and HER2 eliminates radioresistant breast cancer cells[J]. Nature communications, 2020, 11(1): 4591.
[4] Malinova D, Wasim L, Newman R, et al. Endophilin A2 regulates B‐cell endocytosis and is required for germinal center and humoral responses[J]. EMBO reports, 2021, 22(9): e51328.
Ce procotol ne fournit qu'un guide, veuillez le modifier pour correspondre à vos besoins spécifiques.
1.préparation des solutions
(1)Solution de stock : dissoudre DDAO dans DMSO pour préparer une solution de stock à la concentration de 5mM.
Note : Après avoir divisé la solution de stock non - utilisée, conserver à - 20°C ou - 80°C en obscurité pour éviter répéter la congeler et la décongeler.
(2)Solution de travail : Avant l'expérience officielle, diluer la solution de stock par un tampon approprié (comme le substrat sans sérum ou de PBS) à la concentration de travail requise, par exemple 1µM.
Note : veuillez ajuster la concentration de travail optimal selon la situation réelle ou consulter la littérature pour définir vous - même le gradient de concentration. La solution de travail doit être immédiatement préparée et utilisée.
2.utilisation de DDAO pour rechercher l'effet phagocytaire des macrophages sur les cellules cancéreuses[1] (c'est extrait de la littérature, pour fournir seulement une référence)
(1) 0.8×106 RAW264.5 cellules ou 1×106 THP1 ont été ensemencées dans les plates à 6-puits.
(2) Après 24 heures d'incubation, traiter les cellules RAW264.7 par 0.1μg/mL lipopolysaccharide (LPS) pendant 24 heures pour les activer. Différencier les cellules THP1 par traiter les cellules par 40nM phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) pendant 48 heures.
(3) Colorer les macrophages activés par DiO (Cat. No. GC19515) à la concentration finale de 40 nM dans le substrat pendant 20 minutes, ensuite, rincer trois fois par le substrat.
(4) Les cellules cancéreuses ont été marquées par 1μM DDAO (5mM solution de stock, DMSO, conserver à - 20°C) dans PBS à 37°C pendant 15 minutes, puis, laver les cellules par PBS qui contient 1% FBS.
(5) Les cellules (1×106) de cible DDAO-marquées ont été ajoutées aux macrophages (Mφ) et ont été incubées à 37°C au volume final de 2mL pendant 2 heures.
(6) Après l'incubation, récolter les macrophages et les cellules de cible par les lavées tois fois avec EDTA-PBS et ensuite, les digérer avec 0.25% trypsine.
(7) utiliser la cytométrie en flux pour évaluer les cellules doublement - marquées (DIO+/DDAO+), celles qui représentent les cellules cancéreuses qui sont phagocytées par macrophages.
3. Utilisation de DDAO pour rechercher la prolifération des cellules B[2](c'est extrait de la littérature, pour fournir seulement une référence)
(1) Marquer les cellules B par 1µM DDAO et cultiver les cellules dans un substrat RPMI complet supplémenté avec 4μg/mL CD40L, 100ng/mL BAFF, 1μg/mL anti-IgM ou 2.5μg/mL CpG.
(2) Après 3 jours de culture, mesurer la dilution de DDAO (ainsi que l'expression de mCherry dans les cellules CRISPR- ciblées) par utiliser la cytométrie en flux.
Référence :
[1] Candas-Green D, Xie B, Huang J, et al. Dual blockade of CD47 and HER2 eliminates radioresistant breast cancer cells[J]. Nature communications, 2020, 11(1): 4591.
[2]Malinova D, Wasim L, Newman R, et al. Endophilin A2 regulates B?cell endocytosis and is required for germinal center and humoral responses[J]. EMBO reports, 2021, 22(9): e51328.
| Cas No. | 118290-05-4 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C1C(Cl)=C2C(C)(C)C3=C(C=CC(O)=C3)N=C2C=C1Cl | ||
| Formula | C15H11Cl2NO2 | M.Wt | 308.16 |
| Solubility | DMSO : 10.42 mg/mL (33.81 mM) | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2451 mL | 16.2253 mL | 32.4507 mL |
| 5 mM | 649 μL | 3.2451 mL | 6.4901 mL |
| 10 mM | 324.5 μL | 1.6225 mL | 3.2451 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 38 reference(s) in Google Scholar.)