DDAO |
カタログ番号GC61840
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DDAOは近赤外線(NIR)の赤い蛍光プローブであり、可変励起波長(600-650nm)と長い発光波長(λem=656nm)、そして比較的に低いpKa (~5)を持つ。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 118290-05-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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DDAOは近赤外線(NIR)の赤い蛍光プローブであり、可変励起波長(600-650nm)と長い発光波長(λem=656nm)、そして比較的に低いpKa (~5)を持つ[1]。DDAOは、β-ガラクトシダーゼ、スルファターゼ、タンパク質ホスファターゼ2A、カルボキシルエステラーゼ2、ヒトアルブミンとエステラーゼなどの様々な酵素の活性の検出に使われることができる。タンパク質2A(PP-2A)の濃度とDDAO-誘発蛍光の間には線形関係がある[2]。DDAOは、マクロファージによる癌細胞の食作用の研究に使われることができる[3]。DDAOは、B細胞の増殖の研究に使われることができる[4]。
References:
[1] Hou J, Qian M, Zhao H, et al. A near-infrared ratiometric/turn-on fluorescent probe for in vivo imaging of hydrogen peroxide in a murine model of acute inflammation[J]. Analytica Chimica Acta, 2018, 1024: 169-176.
[2] Leira F, Vieites J M, Vieytes M R, et al. Characterization of 9H-(1, 3-dichlor-9, 9-dimethylacridin-2-ona-7-yl)-phosphate (DDAO) as substrate of PP-2A in a fluorimetric microplate assay for diarrhetic shellfish toxins (DSP)[J]. Toxicon, 2000, 38(12): 1833-1844.
[3] Candas-Green D, Xie B, Huang J, et al. Dual blockade of CD47 and HER2 eliminates radioresistant breast cancer cells[J]. Nature communications, 2020, 11(1): 4591.
[4] Malinova D, Wasim L, Newman R, et al. Endophilin A2 regulates B‐cell endocytosis and is required for germinal center and humoral responses[J]. EMBO reports, 2021, 22(9): e51328.
このプランはあくまでもガイドであり、ご自分のニーズに合わせてご調整願います。
1.溶液の調製
(1)貯蔵液：DMSOにDDAOを溶解し、濃度が5mMの貯蔵液を調製する。
注：未使用の貯蔵液を小分けした後、暗所で-20℃または-80℃で保存し、繰り返した冷凍と解凍を避ける。
(2)作業溶液：正式な実験の前に、適切な緩衝液（例えば無血清培地またはPBS）で貯蔵液を、1μMなどの需要の作業濃度まで希釈する。
注：実際の条件に応じて、最適の作業濃度を調整するか、またはご自分で文献を参照して勾配濃度を設置してください。作業溶液は調製後ただちに使用するべき。
2.DDAOを使い、癌細胞におけるマクロファージの貪食作用[1]（文献から作成、参考まで）
(1)0.8×106 RAW264.5細胞または1×106 THP1細胞を6ウェルのプレートに播種した。
(2)24時間培養した後、RAW264.7を0.1μg/mLのリポ多糖類（LPS）で24時間処理し、活性化させた。THP1細胞を40nM phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)で48時間処理し、分離させた。
(3)活性化されたマクロファージを、最終濃度が40nMのDiO (Cat. No. GC19515)で培地で20分間染色し、その後、培地で三回濯いだ。
(4)37℃で、PBSで1μM DDAO (5mMの貯蔵液、DMSO、−20°Cに保存)を癌細胞を15分間標識し、その後1%のFBSを含むPBSで洗浄した。
(5)DDAO標識の標的細胞(1×106)をDiO染色のマクロファージ(Mφ)に添加し、2mLの最終量で37℃で2時間培養した。
(6)培養後、EDTA-PBSと三回洗浄し、Mφと標的細胞を採取し、0.25%のトリプシンで消化した。
(7)フローサイトメトリーを使い、成熟したMφに取り込まれた癌細胞を表す二重標識の細胞（DIO+/DDAO+）を評価した。
3.DDAOを使ってB細胞の増殖を研究する[2]（文献より作成、参考まで）
(1)B細胞を1μM DDAOで標識し、4μg/mL CD40L, 100ng/mL BAFF, 1μg/mL 抗-IgMまたは2.5μg/mL CpGを添加された完全RPMI培地に培養した。
(2)3日間の培養の後、DDAO希釈（CRISPR標識のB細胞におけるmCherryの発見）をフローサイトメトリーで測定した。
References:
[1] Candas-Green D, Xie B, Huang J, et al. Dual blockade of CD47 and HER2 eliminates radioresistant breast cancer cells[J]. Nature communications, 2020, 11(1): 4591.
[2]Malinova D, Wasim L, Newman R, et al. Endophilin A2 regulates B?cell endocytosis and is required for germinal center and humoral responses[J]. EMBO reports, 2021, 22(9): e51328.
| Cas No. | 118290-05-4 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C1C(Cl)=C2C(C)(C)C3=C(C=CC(O)=C3)N=C2C=C1Cl | ||
| Formula | C15H11Cl2NO2 | M.Wt | 308.16 |
| 溶解度 | DMSO : 10.42 mg/mL (33.81 mM) | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2451 mL | 16.2253 mL | 32.4507 mL |
| 5 mM | 649 μL | 3.2451 mL | 6.4901 mL |
| 10 mM | 324.5 μL | 1.6225 mL | 3.2451 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 38 reference(s) in Google Scholar.)