Lyso-Tracker Red (solution) (Synonyms: LysoTracker Red DND-99) |
Catalog No.GC19882
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Lyso-Tracker Red est une sonde fluorescente rouge éosinophile qui peut pénétrer la membrane cellulaire à pH neutre et peut être utilisée pour la coloration fluorescente spécifique des lysosomes dans les cellules vivantes et le traçage des organites acides. Les longueurs d'onde maximales d'excitation et d'émission de Lyso-Tracker Red sont de 577/590 nm.
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Cas No.: 231946-72-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Lyso-Tracker Red est une sonde fluorescente rouge éosinophile qui peut pénétrer la membrane cellulaire à pH neutre et peut être utilisée pour la coloration fluorescente spécifique des lysosomes dans les cellules vivantes et le traçage des organites acides. Les longueurs d'onde maximales d'excitation et d'émission de Lyso-Tracker Red sont de 577/590 nm[1-2].
Lyso-Tracker Red est une sonde fluorescente faiblement alcaline marquée par le DND-99, dans laquelle seule la base faible peut partiellement fournir des protons pour maintenir le pH à un niveau neutre. À l'état de charge neutre, la sonde Lyso-Tracker Red peut diffuser librement à travers la membrane plasmique intacte des cellules vivantes. En raison de l'acidité inhérente aux lysosomes, les groupes faiblement alcalins seront protonés lors de la diffusion dans les lysosomes. Dans cet état chargé, la sonde ne diffuse pas facilement à travers la membrane de l'organite et s'accumule localement dans les lysosomes acides, ce qui permet d'obtenir un marquage fluorescent spécifique des lysosomes. Lyso-Tracker Red convient pour la coloration fluorescente des lysosomes dans les cellules vivantes, mais pas pour la coloration fluorescente des lysosomes dans les cellules fixées. Si les cellules colorées avec Lyso-Tracker Red doivent être fixées, on peut essayer le glutaraldéhyde à 3 %[1-2].
Lyso-Tracker Red doit être utilisé à de très faibles concentrations pour obtenir une excellente sélectivité. Des études sur la cinétique d'endocytose de la sonde Lyso-Tracker Red ont montré que l'absorption du colorant dans les cellules vivantes ne prend que quelques secondes. Cependant, ces sondes lysosomales provoquent l'alcalinisation des lysosomes et une incubation de longue durée peut induire une augmentation du pH lysosomal. Il est donc recommandé de ne pas incuber les cellules avec la sonde pendant trop longtemps avant de procéder à l'imagerie. Lors de l'évaluation du nombre et de l'état des lysosomes dans les cellules HUVEC, les compartiments acides des HUVEC peuvent être visualisés par coloration avec Lyso-Tracker Red[3]. La distribution des lysosomes peut être contrôlée en incubant des cellules HepG2 avec 100 nM de Lyso-Tracker Red pendant 30 minutes[4]. En outre, 100 nM de Lyso-Tracker Red peuvent pénétrer la membrane de la cellule MDCK à pH neutre et se répartir dans les organites acides, tels que les endosomes tardifs et les lysosomes dans les cellules vivantes[5].
Ce plan n'est qu'un guide, veuillez le modifier pour qu'il réponde à vos besoins spécifiques.
1. Préparer la solution de coloration rouge Lyso-Tracker
(1) Préparer la solution de base : Il est recommandé d'utiliser du DMSO anhydre pour dissoudre la poudre et préparer une solution mère d'une concentration de 1mM.Note : Il est recommandé d'aliquoter la solution stock non utilisée et de la congeler à -20°C ou -80°C à l'abri de la lumière.
(2) Préparation de la solution de travail : Diluer la solution mère avec un tampon approprié (tel que du milieu sans sérum ou du PBS) pour préparer une solution de travail avec une concentration de 50-100nM.
Notes :
① Veuillez ajuster la concentration de la solution de travail en fonction de la situation réelle et la préparer selon les besoins.
② Afin de réduire les faux positifs causés par un bruit de fond trop élevé ou une surcharge, la concentration des colorants doit être aussi faible que possible.
③ Si les cellules sont incubées dans un tampon sans colorant après la coloration, on observera une atténuation des signaux de fluorescence et une vacuolisation des cellules.
2. Coloration des suspensions cellulaires
(1) Cellules en suspension : Centrifuger les cellules en suspension à 4°C et 1000g pendant 3-5 minutes, jeter le surnageant et laver deux fois avec du PBS pendant 5 minutes à chaque fois.
(2) Cellules adhérentes : Laver deux fois avec du PBS, ajouter de la trypsine pour digérer les cellules et centrifuger à 1000g pendant 3-5 minutes après la fin de la digestion.
(3) Utiliser 0,5-1mL de solution de travail pour remettre en suspension environ 106 cellules et incuber à température ambiante dans l'obscurité pendant 5-30 minutes. Le temps d'incubation optimal pour différentes cellules est différent, veuillez l'étudier vous-même en fonction des besoins expérimentaux spécifiques.
(4) Après l'incubation, centrifuger à 1000g pendant 5 minutes, éliminer le surnageant et ajouter du PBS pour laver 2 à 3 fois, 5 minutes à chaque fois.
(5) Remettre les cellules en suspension dans du milieu de culture cellulaire sans sérum préchauffé ou du PBS et observer au microscope à fluorescence ou en cytométrie de flux.
3. Coloration de l'adhésion cellulaire
(1) Cultiver des cellules adhérentes sur des lamelles stériles.
(2) Retirer la lamelle couvre-objet du milieu de culture, aspirer l'excès de milieu de culture et placer la lamelle couvre-objet dans un environnement humide.
(3) Ajouter 100μL de solution de travail de colorant à partir d'un coin de la lamelle couvre-objet et agiter doucement pour couvrir uniformément toutes les cellules avec le colorant.
(4) Incuber à température ambiante dans l'obscurité pendant 5 à 30 minutes. Le temps de culture optimal varie selon les cellules.
(5) Après l'incubation, jeter la solution de travail du colorant et laver la lamelle 2 à 3 fois avec une solution de culture préchauffée.
4. Détection de la fluorescence : La lumière d'absorption/émission maximale de Lyso-Tracker Red est de 577/590 nm.
Notes :
① Une étude cinétique sur l'internalisation de Lyso-Tracker a révélé que le taux d'absorption de cette sonde par les cellules vivantes peut être achevé en quelques secondes. Cependant, la sonde présente un « effet d'alcalinisation » lysosomal, et une incubation prolongée peut entraîner une augmentation du pH lysosomal. Par conséquent, l'incubation de la cellule à 37℃ pendant 1 à 5 minutes est un indicateur de pH utile.
② Si la coloration n'est pas suffisante, il est recommandé d'augmenter la concentration du colorant ou de prolonger le temps de coloration pour permettre au colorant de s'agréger sur les lysosomes.
③ Les colorants fluorescents présentent tous des problèmes d'extinction. Essayez d'éviter la lumière autant que possible afin de ralentir l'extinction de la fluorescence.
④ Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des vêtements de laboratoire et des gants jetables lors de l'utilisation.
| Cas No. | 231946-72-8 | SDF | |
| Synonymes | LysoTracker Red DND-99 | ||
| Formula | C20H24BF2N5O | M.Wt | 399.25 |
| Solubility | DMSO : 5 mg/mL (12.52 mM; Need ultrasonic) | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.5047 mL | 12.5235 mL | 25.047 mL |
| 5 mM | 500.9 μL | 2.5047 mL | 5.0094 mL |
| 10 mM | 250.5 μL | 1.2523 mL | 2.5047 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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