Lyso-Tracker Red (solution) (Synonyms: LysoTracker Red DND-99) |
カタログ番号GC19882
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Lyso-Tracker Redは好酸球性の赤い蛍光プローブであり、中性のpHで細胞膜を貫通でき、生細胞のリソソーム特異性蛍光染色と、酸性小器官の追跡に使われることができる。Lyso-Tracker Redの最大励起と発光波長は577/590nmである。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 231946-72-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Lyso-Tracker Redは好酸球性の赤い蛍光プローブであり、中性のpHで細胞膜を貫通でき、生細胞のリソソーム特異性蛍光染色と、酸性小器官の追跡に使われることができる。Lyso-Tracker Redの最大励起と発光波長は577/590nmである[1-2]。
Lyso-Tracker RedはDND-99で蛍光標識された弱性アルカリ蛍光プローブであり、pHを中性に維持させるためには、弱塩基だけが部分的にプロトンを提供することができる。中性電荷の状態では、Lyso-Tracker Redプローブは、生細胞の無傷な細胞膜を通じて自由に放散できる。リソソームにおける酸性が原因で、弱性アルカリ基は、リソソームに放散するときにプロトン化される。この電荷状態では、プローブは簡単に小器官の膜を通過することはできず、酸性リポソームで局所蓄積を形成し、よってリソソームの特異性蛍光標識をする。Lyso-Tracker Redは、生細胞でリポソームの蛍光染色には適しているが、固定細胞におけるリソソームの蛍光染色には適していない。Lyso-Tracker Redで染色された細胞を固定する必要があれば、3%のグルタルアルデヒドで試すことができる[1-2]。
素晴らしい選択性を達成するために、Lyso-Tracker Redは非常に低い濃度で使用しなければならない。Lyso-Tracker Redプローブのエンドサイトーシスの動態の研究は、生細胞への染料の取り込みは数秒間しかかからないことを示した。しかし、これらのリソソームプローブはリソソームをアルカリに傾けるので、長期の培養はリソソームpHで増加を誘発する。よって、イメージングの前、細胞はプローブで培養の時間は長くしないことを推奨する。HUVEC細胞でリソソームの数と状態を評価するとき、HUVECの中の酸性部分は、Lyso-Tracker Redで染色することで可視化できる[3]。リソソームの分化は、100nMのLyso-Tracker RedでHepG2細胞を30分間培養することで、監視できる[4]。更に、100nMのLyso-Tracker Redは中性pHでMDCK細胞膜を通過でき、生細胞の後期エンドソームとリソソームなど、酸性有機物で分化する[5]。
このプランはあくまでもガイドであり、ご自分のニーズに合わせてご調整願います。
1.Lyso-Tracker Red染色溶液の調製
（1）貯蔵液の調製：粉末を溶解するには、無水DMSOを使うことを推奨する。濃度が1mMの貯蔵液を調製する。
注：未使用の貯蔵液を小分けし、暗闇で-20℃または-80℃で冷凍することを推奨する。
（2）作業溶液の調製：適切な緩衝液（例えば無血清またはPBS）で貯蔵液を希釈し、濃度が50-100nMの作業溶液を調製する。
注：
①実際の条件に合わせて、作業液の濃度を調製し、需要に応じて調製してください。
②過度に高いバックグラウンドまたはオーバーロードによる偽の陽性を減らすために、色素の濃度はできるだけ低くするべき。
③細胞が染色後、染色液のない緩衝液で培養されたら、蛍光シグナルの弱化と細胞の空胞化が観察される。
2.細胞懸濁液の染色
（1）懸濁細胞：4℃、1000gで懸濁細胞を3-5分間遠心分離し、上清を除去し、PBSで一回に5分間、計二回洗浄する。
（2）付着細胞：PBSで二回洗浄し、トリプシンを添加し細胞を消化し、消化が終わったあとは1000gで3-5分間遠心分離する。
（3）0.5-1mLの作業溶液を使い、約106の細胞を再懸濁し、室温で暗闇で5-30分間培養する。異なる細胞に対する最適な培養時間は異なるので、特定の実験ニーズに合わせてご自分で研究してください。
（4）培養後、1000gで5分間遠心分離し、上清を除去し、PBSを添加した、1回に5分間、2-3洗浄する。
（5）再棒を事前加温した無血清培地またはPBSで細胞を再懸濁し、蛍光顕微鏡またはフローサイトメトリーで観察する。
3.細胞接着の染色
（1）接着細胞を無菌カバーガラスで培養する。
（2）カバーガラスを培地から除去し、余分の培養培地を吸い出し、カバーガラスを湿った環境で置く。
（3）100μLの染料作業溶液をカバーガラスの一角から添加し、ゆっくり振動し、全ての細胞が染料で均一にカバーされるようにする。
（4）暗闇で室温で5-30分間培養する。異なる細胞の最適培養時間はそれぞれ異なる。
（5）培養後、染料作業溶液を廃棄し、事前加温した培養溶液でカバーガラスを2-3回洗浄する。
4.蛍光の検出：Lyso-Tracker Redの最大吸収/発光は577/590nmである。
注：
①Lyso-Trackerの内部移行に関する活動研究は、生細胞によるこのプローブの取り込み率は数秒間で完成されることを示した。しかし、このプローブはリソソーム「アルカリ化効果」を示し、延長した培養は、リソソームpHの増加に導くことができる。よって、細胞を37℃で1-5分間培養することは、有用なpH指示方法である。
②染色が不足であれば、染料濃度を増やす、または染色時間を伸ばすことで、リポソームで染料を集合させることを推奨する。
③蛍光色素はみな消光の問題がある。それを遅らせるためには、できるだけ光から避けてください。
④安全と健康のために、白衣と使い捨ての手袋を装着してください。
| Cas No. | 231946-72-8 | SDF | |
| 同義語 | LysoTracker Red DND-99 | ||
| Formula | C20H24BF2N5O | M.Wt | 399.25 |
| 溶解度 | DMSO : 5 mg/mL (12.52 mM; Need ultrasonic) | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.5047 mL | 12.5235 mL | 25.047 mL |
| 5 mM | 500.9 μL | 2.5047 mL | 5.0094 mL |
| 10 mM | 250.5 μL | 1.2523 mL | 2.5047 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 5 reference(s) in Google Scholar.)