Lyso-Tracker Red (solution) (Synonyms: LysoTracker Red DND-99) |
Catalog No.GC19882
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Lyso-Tracker Red는 중성 pH에서 세포막을 침투할 수 있는 이색적 빨간색 형광 탐지기으로 살아있는 세포의 리소좀 특이 형광 염색과 산성 세포기관의 추적에 사용된다. Lyso-Tracker Red의 최대 자극 파장과 방출 파장은 577/590nm이다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 231946-72-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Lyso-Tracker Red는 중성 pH에서 세포막을 침투할 수 있는 이색적 빨간색 형광 탐지기으로 살아있는 세포의 리소좀 특이 형광 염색과 산성 세포기관의 추적에 사용된다. Lyso-Tracker Red의 최대 자극 파장과 방출 파장은 577/590nm이다.
Lyso-Tracker Red는 DND-99로 형광 표시된 약한 알칼리성 형광 탐지기로 약한 알칼리성 기만이 중성 pH를 유지하기 위해 부분적으로 프로톤을 제공할 수 있다. 중성 전하 상태에서 Lyso-Tracker Red 탐지기는 살아있는 세포의 완전한 플라스마막을 자유롭게 흡수할 수 있다. 리소솜 내부의 내재된 산성 때문에 약한 알칼리성 기는 리소솜으로 흡수될 때 프로톤화된다. 이 전하 상태에서 탐지기는 세포기 기막을 통과하기 어렵고 산성 리소솜 내에서 지역적으로 쌓여 리소솜의 특이 형광 표시를 달성한다. Lyso-Tracker Red는 살아있는 세포의 리소솜 형광 염색에 적합하지만 고정된 세포의 리소솜 형광 염색에는 적합하지 않는다. Lyso-Tracker Red로 염색된 세포를 고정해야 하는 경우 3% 글루탈알데히드를 시도해볼 수 있다[1-2].
Lyso-Tracker Red는 뛰어난 선택성을 달성하기 위해 매우 낮은 농도로 사용되어야 한다. Lyso-Tracker Red 탐지기의 섭취 동역학 연구에 따르면 염료가 살아있는 세포에 흡수되는 것은 몇 초 만에 일어난다. 그러나 이러한 리소솜 탐지기는 리소솜를 알칼리성으로 만들고 장기 흡입은 리소솜 pH를 증가시킬 수 있다. 그런데 영상화하기 전에 세포와 탐지기를 너무 오랫동안 흡입시키지 않는 것이 좋은다. HUVEC 세포에서 리소솜의 수량과 상태를 평가할 때 HUVEC의 산성 구역을 Lyso-Tracker Red로 염색하여 시각화할 수 있다[3]. HepG2 세포에 100 nM Lyso-Tracker Red를 30분 동안 흡입시켜 리소솜의 분포를 관철할 수 있다[4]. 게다가 100 nM Lyso-Tracker Red는 중성 pH에서 MDCK 세포막을 투과하여 살아있는 세포의 후기 엔도솜과 리소솜과 같은 산성 세포기관 내에 분포할 수 있다[5].
이 계획은 단지 가이드를 제공하고 구체적인 요구에 맞게 수정ㅎ하시기 바랍니다.
1.Lyso-Tracker Red 염색 용액 준비
(1) 저장 용액 준비: 무수 DMSO를 사용하여 분말을 녹이고 1mM 농도의 저장 용액을 준비하는 것이 추천됩니다.
참고: 사용하지 않은 저장 용액을 등분하여 -20°C나 -80°C의 어두운 곳에 냉동 보관하는 것이 추천됩니다.
(2) 작업 용액 준비: 적합한 버퍼(예: 무혈청은 매체나 PBS)로 저장 용액을 희석하여 50-100nM 농도의 작업 용액을 준비합니다.
참고 사항:
① 실제 상황에 따라 작업 용액의 농도를 조정하고 필요에 따라 준비하시시 바랍니다.
② 배경이 지나치게 높거나 과부하가 발생하여 가짜 긍정 결과를 줄이기 위해 염료의 농도는 가능한 낮게 유지해야 합니다.
③ 염색 후 염료가 없는 버퍼에서 세포를 흡입시키면 형광 신호가 약화되고 세포의 공팍화 현상이 관찰됩니다.
2.세포 소생액 염색
(1)소생된 세포: 4°C와 1000g의 조건에서 소생된 세포를 3-5분간 원심 분리기로 회전시킨 후 상층액을 버리고 PBS로 두 번 씻어 5분씩 진행합니다.
(2)고착 세포: PBS로 두 번 씻은 후 트립신을 추가하여 세포를 분해시키고 분해가 완료되면 1000g으로 3-5분간 중앙 분리기로 회전시킵니다.
(3)0.5-1mL 작업 용액으로 약 106개의 세포를 재소생시키고 실온에서 어둠에서 5-30분간 발효시킵니다. 다양한 세포에 대한 최적 발효 시간은 다르므로 구체적인 실험 요구에 따라 스스로 탐색해보아야 합니다.
(4)배양 후 1000g으로 5분간 원심 분리기로 회전시킨 후 상층액을 제거하고 PBS로 2-3번 씻어 5분씩 진행합니다.
(5)미리 데우긴 무혈청은 세포 배양기나 PBS에서 세포를 재소생시키고 형광 현미경이나 흐름세포기로 관찰합니다.
3.세포 접착 염색
(1)멸균된 슬라이드에 접착 세포를 배양합니다.
(2) 슬라이드를 배양기에서 제거하고 과도한 배양기를 흡인하여 슬라이드를 습한 환경에 놓습니다.
(3) 슬라이드의 한 모서리에 100μL의 염료 작업 용액을 추가하고 살짝 흔들어 염료가 모든 세포를 균일하게 덮도록 합니다.
(4) 실온에서 어둠에서 5-30분간 발효시킵니다. 다양한 세포에 대한 최적 발효 시간은 다릅니다.
(5) 배양 후 염료 작업 용액을 버리고 미리 데운 배양기를 사용하여 슬라이드를 2-3번 세척습니다.
4.형광 탐지: Lyso-Tracker Red의 최대 흡수/발광광 파장은 577/590nm입니다.
참고 사항:
① Lyso-Tracker의 내화 운동학적 연구에 따르면 살아있는 세포가 이 탐지기를 흡수하는 속도는 몇 초 내에 완료될 수 있습니다. 그런데 해당 탐지기는 림파장기의 "알칼리화 효과"를 보이고 장기 흡입은 리소솜 pH를 증가시킬 수 있습니다. 그러므로 세포를 37℃에서 1-5분 동안 흡입시키는 것은 유용한 pH 지시기입니다.
② 염색이 충분하지 않은 경우 염료 농도를 높이거나 염색 시간을 연장하여 염료가 리소솜에서 쌓이도록 추천합니다.
③ 형광 염료는 모두 꺼끄러짐 문제를 가지고 있습니다. 형광 억제를 늦추기 위해 최대한 빛을 피해주세요.
④ 안전과 건강을 위해 작업 실험실 옷과 일회용 장갑을 착용하시기 바랍니다.
| Cas No. | 231946-72-8 | SDF | |
| Synonyms | LysoTracker Red DND-99 | ||
| Formula | C20H24BF2N5O | M.Wt | 399.25 |
| Solubility | DMSO : 5 mg/mL (12.52 mM; Need ultrasonic) | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.5047 mL | 12.5235 mL | 25.047 mL |
| 5 mM | 500.9 μL | 2.5047 mL | 5.0094 mL |
| 10 mM | 250.5 μL | 1.2523 mL | 2.5047 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 5 reference(s) in Google Scholar.)