Nitrotetrazolium Blue chloride (Synonyms: NBT; Nitro blue tetrazolium chloride) |
カタログ番号GC15554
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ニトロテトラゾリウムブルー塩化物(Nitrotetrazolium Blue chloride)(NBT)は脱水素酵素の基質であり、ウェスタンブロッティングと免疫組織化学染色でアルカリホスファターゼ(ALP)基質の5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリルリン酸(BCIP)とともに使われ、紫青色の沈殿物を生産する。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 298-83-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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ニトロテトラゾリウムブルー塩化物(Nitrotetrazolium Blue chloride)(NBT)は脱水素酵素の基質であり、ウェスタンブロッティングと免疫組織化学染色でアルカリホスファターゼ(ALP)基質の5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリルリン酸(BCIP)とともに使われ、紫青色の沈殿物を生産する[1]。ニトロテトラゾリウムブルー塩化物は胚または組織での標的mRNAの局在を視覚化することができる[2]。ニトロテトラゾリウムブルー塩化物は細胞あるいは組織の中の反応性酸素種(ROS)とスーパーオキシドアニオン(O2-)と反応することができ、濃い青色の不溶性ホルマザン化合物を生産する[3, 4]。ニトロテトラゾリウムブルー塩化物は細胞内ALPとコハク酸脱水素酵素(SDH)を染色できる[5, 6]。
References:
[1]Santangelo K S, Schaefer D M W, Leavell S E, et al. Special Staining Techniques: Application and Quality Assurance[J]. Veterinary Cytology, 2020: 47-72.
[2]Narayanan R, Oates A C. Detection of mRNA by whole mount in situ hybridization and DNA extraction for genotyping of zebrafish embryos[J]. Bio-protocol, 2019, 9(6): e3193-e3193.
[3]Lamacchia M, Dyrka W, Breton A, et al. Overlapping Podospora anserina transcriptional responses to bacterial and fungal non self indicate a multilayered innate immune response[J]. Frontiers in microbiology, 2016, 7: 471.
[4]Kumar D, Yusuf M A, Singh P, et al. Histochemical detection of superoxide and H2O2 accumulation in Brassica juncea seedlings[J]. Bio-protocol, 2014, 4(8): e1108-e1108.
[5]Yang C S, Gu Z T, Ding R, et al. Retracted: Long non‐coding RNA MEG3 silencing and microRNA‐214 restoration elevate osteoprotegerin expression to ameliorate osteoporosis by limiting TXNIP[J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2021, 25(4): 2025-2039.
[6]Wang G, Biswas A K, Ma W, et al. Metastatic cancers promote cachexia through ZIP14 upregulation in skeletal muscle[J]. Nature medicine, 2018, 24(6): 770-781.
このプランはあくまでガイドであり、お客様にはご自分のニーズに合わせて調整願います。
1.NBTとBCIP(GC39345)免疫ブロット法のプロトコール[1]（文献より作成、参考までに）
(1)溶液の調整：
NBT貯蔵液：10mL 70% DMF水溶液に0.5gのNBTを溶解する。
BCIP貯蔵液：10mL 70% DMF水溶液に0.5gのBCIPを溶解する。
基質緩衝液：100mMのNaClと5mMのMgCl2の含んだ100 mMのジエタノールアミン緩衝液(pH 9.5)。
(2)66 µLのNBT貯蔵液を10mLの基質緩衝液に入れて、徹底的に混合させ、NBT/BCIP溶液を調製する。33 μLのBCIP貯蔵液を溶液の中に入れる。1時間以内にNBT/BCIP溶液を使う。
(3)ブロッティング膜を適切な容器に置き、NBT/BCIP溶液を入れる。15 × 15 cm2の膜には10 mLの溶液を使う。室温で攪拌し培養して、バンドが適切に暗くなるまでしつづける。一般的には30分くらいかかる。
(4)NBT/BCIP溶液を除去し、水でブロットを濯ぎ、反応を終わらせる。
2.苗木の中のスーパーオキシド蓄積の組織化学的な検出の為のNBT[2]（文献より作成、参考までに）
(1)琥珀色のボトルで、50mMのリン酸ナトリウム緩衝液(pH 7.5)に0.1 gのNBTを溶解し、量を50mlにさせ、0.2%のNBT染色液を作る。
(2) 苗木をテストチューブに置き、NBT染色液に浸透し、アルミ箔で包み、室温で一晩中放置する。
(3) 染色液を注ぎだし、無水のエタノールで苗木を浸潤させ、沸騰した湯の中で10分間加熱し（必要な場合は加熱の時間を長くさせることも可能、断続的に揺らす）、クロロフィルを除去する。
(4) 苗木を60%のグリセロールに浸潤されたペパータオルに移転させ、染色した苗を対照的な背景で撮影する。
注：汚染を避けるために、全ての溶液が新鮮に調製され、全ての機械が綺麗であることを確保するべきである。反応物との直接な接触は避けるべきである。
References:
[1] Kurien B T, Bachmann M P. On-membrane renaturation of recombinant Ro60 autoantigen by calcium ions[J]. Detection of Blotted Proteins: Methods and Protocols, 2015: 255-261.
[2] Kumar D, Yusuf M A, Singh P, et al. Histochemical detection of superoxide and H2O2 accumulation in Brassica juncea seedlings[J]. Bio-protocol, 2014, 4(8): e1108-e1108.
| Cas No. | 298-83-9 | SDF | |
| 同義語 | NBT; Nitro blue tetrazolium chloride | ||
| Chemical Name | 3,3'-(3,3'-dimethoxy-[1,1'-biphenyl]-4,4'-diyl)bis(2-(4-nitrophenyl)-5-phenyl-2H-tetrazol-3-ium) | ||
| Canonical SMILES | COC1=C([N+]2=NC(C3=CC=CC=C3)=NN2C4=CC=C([N+]([O-])=O)C=C4)C=CC(C5=CC(OC)=C([N+]6=NC(C7=CC=CC=C7)=NN6C8=CC=C([N+]([O-])=O)C=C8)C=C5)=C1 | ||
| Formula | C40H30N10O6 • 2Cl | M.Wt | 817.63 |
| 溶解度 | ≥ 10mg/mL in Water with gentle warming, 70%DMF : ≥ 100 mg/mL (122.30 mM), DMSO : 33.33 mg/mL (40.76 mM) | Storage | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.223 mL | 6.1152 mL | 12.2305 mL |
| 5 mM | 244.6 μL | 1.223 mL | 2.4461 mL |
| 10 mM | 122.3 μL | 611.5 μL | 1.223 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 7 reference(s) in Google Scholar.)