Real Thiol |
カタログ番号GC34359
One-Click Copy Product Info
|
Real Thiol（RT）は可逆的な反応に基づいた蛍光プローブであり、生細胞でリアルタイムグルタチオン（GSH）の動態を定量的にモニタリングできる。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 2280796-90-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
_1-3.$$$39978408@51.jpg');)
_1-9.$$$38538795@65.jpg');)
_1-9.$$$39112701@51.jpg');)
_1-7.$$$37316672@70.jpg');)
_366-372.$$$36198801@70.jpg');)
.$$$38565142@65.jpg');)
_1867-1883.$$$33248023@67.jpg');)
_eads6055.$$$39977546@45.jpg');)
_eadm9805.$$$40080571@45.jpg');)
_eadj3020.$$$39666821@45.jpg');)
_1-20.$$$39757301@28.jpg');)
_1-24.$$$38898113@28.jpg');)
_273-287.$$$36806353@46.jpg');)
_1-16.$$$37156877@44.jpg');)
_1-19.$$$37460805@44.jpg');)
_1291-1307.$$$34518654@46.jpg');)
Real Thiol（RT）は可逆的な反応に基づいた蛍光プローブであり、生細胞でリアルタイムグルタチオン（GSH）の動態を定量的にモニタリングできる。Real ThiolとそのGSH付加体はそれぞれ487と562nmで最大の蛍光を示し、励起波長はそれぞれ405と488nmである。Real ThiolとGSHの間の結合速度定数（Kon）は7.5M−1s−1であり、解離定数（Koff）は0.0203s−1であり、平衡解離定数（Kd）は3.7mMである。Real Thiolとグルタチオンが反応する場合、比例的な蛍光応答の広いダイナミックレンジを示し、生細胞で、1-10mMの範囲で、GSHレベルのモニタリングを実現する。Real Thiolは多用途なツールであり、共焦点顕微鏡法、フローサイトメトリーに基づいた単細胞のグルタチオンのレベルのハイスループット定量に使える[1]。
このプランは文献から作成されたものであり、ご自分の具体的なニーズに合わせてご調整願います[1][2]。
1.染色作業溶液の調製
（1）原液の調製：DMSOにReal Thiolを溶解し、10mMの原液を調製する。
注：繰り返される冷凍と融解を避けるために、未使用の原液を分注し、暗所、-20°Cまたは-80°Cで保存するべきである。
（2）作業溶液の調製：OptiMEMみたいな無血清培地を使い、1µMに希釈する。
注：作業溶液を新鮮に調製し、4℃、または氷の上で短く保存する。
2.細胞懸濁液の染色
（1）浮遊細胞：4°C、1000gで3-5分間遠心分離し、上清を廃棄し、PBSで5分間/回、計2回洗浄する。
（2）接着細胞：PBSで二回洗浄し、トリプシンを添加して細胞を消化し、消化が完了した後は1000gで3-5分間遠心分離する。
（3）1µM Real Thiol作業溶液を添加して細胞を再懸濁し、37℃、暗所で5-15分間インキュベートする。異なる細胞の最適なインキュベーション時間が異なるため、具体的な実験のニーズに合わせてご自分でご検討願います。
（4）インキュベーションの後、1000gで5分間遠心分離し、上清を除去し、PBSを添加して5分間/回、2-3回洗浄する。
（5）予め温めた無血清細胞培地またはPBSで細胞を再懸濁し、蛍光顕微鏡またはフローサイトメトリーで観察する。
3.細胞接着染色
（1）殺菌したカバーガラスで接着細胞を培養する。
（2）カバーガラスを培地から除去し、余分の培地を吸引除去し、カバーガラスを加湿環境に置く。
（3）100μLの染料作業溶液をカバーガラスの一角から添加し、10μMの最終濃度を実現し、ゆっくり揺らして全ての細胞を染料で均一にカバーする。
（4）37°C、暗所で5-15分間インキュベートする。異なる細胞の最適なインキュベーション時間が異なるため、具体的な実験のニーズに合わせてご自分でご検討願います。
（5）インキュベーションの後、染料作業溶液を廃棄し、予め温めた培養溶液でカバーガラスを2-3回洗浄し、蛍光顕微鏡またはフローサイトメトリーで観察する。
4.蛍光の検出：蛍光を405nmと488nmのチャネルで測定し、細胞内GSHのレベルを、二つのチャネルから蛍光強度比を算出することで定量化した。
注意事項：
1）蛍光染料には全て消光の問題が存在する。蛍光消光を遅らせるためにはできるだけ光から避けて下さい。
2）ご自分の安全と健康の為に、白衣と使い捨ての手袋をご着用願います。
| Cas No. | 2280796-90-7 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C1OC2=CC(N3CCC3)=CC=C2C=C1/C=C(C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)=O)\C#N | ||
| Formula | C20H17N3O7 | M.Wt | 411.36 |
| 溶解度 | DMSO : ≥ 101 mg/mL (245.53 mM) | Storage | Store at 2-8°C,protect from light |
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.431 mL | 12.1548 mL | 24.3096 mL |
| 5 mM | 486.2 μL | 2.431 mL | 4.8619 mL |
| 10 mM | 243.1 μL | 1.2155 mL | 2.431 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >95.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)