Alkyne tyramide (Synonyms: Alk-Ph) |
Catalog No.GC60573
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Alkyne tyramide는 수용성과 세포벽 투과성을 가진 클릭가능한 아스코르바테 페로크시다이제 2 (APEX2) 프로브로 완전한 엽소미세포에서 APEX 표시 효율을 크게 향상시키고 APEX 표시 사이트를 식별하는 데 도움을 주어 미토콘드리아 단백질의 막 토폴로지를 명확하게 결정할 수 있다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 1694495-59-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Alkyne tyramide는 수용성과 세포벽 투과성을 가진 클릭가능한 아스코르바테 페로크시다이제 2 (APEX2) 프로브로 완전한 엽소미세포에서 APEX 표시 효율을 크게 향상시키고 APEX 표시 사이트를 식별하는 데 도움을 주어 미토콘드리아 단백질의 막 토폴로지를 명확하게 결정할 수 있다.
엔지니어링된 아스코르바테 페로크시다이제 (APEX)는 살아있는 세포에서 단백질과 RNA의 근접에 의존하는 표시를 위한 강력한 도구이다. Alkyne tyramide는 매우 높은 특이성 (94%)과 전통적인 APEX2 기질인 바이오틴-페놀 (BP)보다 더 높은 커버리지를 가진 미토콘드리아 기질에서의 프로텍토믹 분석을 가능하게 하는 클릭가능한 APEX 서브스트레이트로 식별되었다. Alkyne tyramide 표시는 APEX2 표현과 H2O2의 존재에 의존하고 프로브 농도가 1mM보다 클 때 APEX2 중개의 엽소미세포 미토콘드리아 Alkyne tyramide표시는 더 효율적이다[1].
References:
[1] Li Y, Tian C, Liu K, et al. A clickable APEX probe for proximity-dependent proteomic profiling in yeast[J]. Cell Chemical Biology, 2020, 27(7): 858-865. e8.
이 실험은 문헌에서 나왔고 구체적인 필요에 따라 수정하시기 바랍니다.
1. 효모 균주 변환 후 SD 세포 배양액에서 로그기 중기에 성장한 후 SG 세포 매체나 YPG 매체로 이식했습니다. 세포를 수집하고 PBS 버퍼로 두 번 씻겼습니다.
2.세포 저축물을 2.5mM Alkyne tyramide를 포함한 PBS 버퍼(약 500μL Alkyne tyramide용액을 5 OD600 엽소미세포에 사용)에 배양 시킨 후 실온에서 30분 동안 배양했습니다. 그 후 H2O2를 1분 동안 추가하여 페놀 활성산소의 생성과 APEX2 표시를 유발했습니다.
3. Alkyne tyramide 표시를 중단하기 위해 동등한량의 쿼치 에이전트 용액(10mM 나트륨 아지드, 10mM 나트륨 아스코르바테, 5mM 트롤록스)을 추가합니다.
4.APEX2 표시 후 세포를 PBS 버퍼로 두 번 씻은 후 프로텍타이즈 억제제 혼합물이 포함된 PBS 버퍼에 배양 시킵니다.
5.세포를 동등 한량의 유리 구슬과 섞어 4°C에서 2000rpm의 속도로 1분간 진동합니다. 그 후 세포를 얼음 위에 놓고 1분간 냉각합니다. 진동-냉각 사이클을 10회 반복하여 엽소미세포를 라이즈합니다. 초과량의 소분자를 제거하기 위해 -80°C의 차가운 메탄올에서 단백질을 정화하고 3시간 동안 정화합니다.
6.단백질은 0.5% SDS물에 정화되고 배양 되었습니다. 그 후 CuSO4(333μM), BTTAA(666μM), 나트륨 아스코르바테(2.5mM)가 포함된 환경에서 아지드 Cy5(100μM)와 실온에서 1시간 동안 반응했습니다. 표시된 단백질 샘플은 12% SDS-PAGE 갤에서 분리되었습니다.
7.갤에서의 형광 분석을 위해 갤은 헹구어 용액(60% v/v 물, 30% v/v 메탄올, 10% v/v 에틸렌산)으로 사용한 후 Typhoon FLA 9500 imager에서 영상화가 진행되었습니다.
참조 문헌:
[1] Li Y, Tian C, Liu K, et al. A clickable APEX probe for proximity-dependent proteomic profiling in yeast[J]. Cell Chemical Biology, 2020, 27(7): 858-865. e8.
| Cas No. | 1694495-59-4 | SDF | |
| Synonyms | Alk-Ph | ||
| Canonical SMILES | C#CCCC(NCCC1=CC=C(O)C=C1)=O | ||
| Formula | C13H15NO2 | M.Wt | 217.26 |
| Solubility | DMSO: 100 mg/mL (460.28 mM) | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 4.6028 mL | 23.0139 mL | 46.0278 mL |
| 5 mM | 920.6 μL | 4.6028 mL | 9.2056 mL |
| 10 mM | 460.3 μL | 2.3014 mL | 4.6028 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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