BODIPY 505/515

이 계획은 단지 가이드를 제공하고 구체적인 필요에 맞게 수정하시기 바랍니다.

1.염료 용액 준비

(1) 저장 용액 준비: BODIPY 505/515를 DMSO에 녹여 농도가 1-5mM인 저장 용액을 준비합니다.

참고: 사용하지 않은 저장 용액은 -20°C나 -80°C의 어두운 곳에 분사하여 보관하여 반복적인 냉동과 해동을 피합니다.

(2) 작업 용액 준비: 적절한 버퍼 (예: 세륨이 없는 매체나 PBS)로 저장 용액의 농도가 1-5 μM인 작업 용액을 준비합니다.

참고: 실제 상황에 따라 작업 용액의 농도를 조정하고 즉시 준비하십시오.

2.세포 서스펜션 염색

(1)소생된 세포: 4°C에서 1000g으로 3-5분간 원심분리하여 상층액을 버리고 매회 PBS로 5분간 2회 세척합니다.

(2) 고착세포: PBS로 두 번 씻은 후 트립신을 추가하여 세포를 분해하고 분해가 완료된 후 1000g으로 3-5분간 원심분리합니다.

(3) BODIPY 505/515 작업 용액 1 mL을 추가하여 세포를 소생시킨 후 37°C의 어두운 곳에서 5-30분 동안 배양합니다. 다양한 세포에 대한 최적의 배양 시간은 다르고 구체적인 실험 필요에 따라 스스로 탐색해 주시기 바랍니다.

(4) 배양 후 1000g으로 5분간 원심분리하여 상층액을 제거하고 PBS를 추가하여 매회 5분씩 2-3회 세척합니다.

(5) 미리 데우긴 무혈청 세포 배양액이나 PBS에서 세포를 소생시켜 형광현미경이나 유세포분석기로 관찰합니다.

3.세포 착색

(1) 멸균된 슬라이드에 고착세포를 배양합니다.

(2) 배양액에서 슬라이드를 제거하고 배양액을 너무 많이 빼지 않도록 하고 슬라이드를 습한 환경에 놓습니다.

(3) 슬라이드의 한 모퉁이에 염료 작업 용액 100 μL을 추가하고 살짝 흔들어 모든 세포를 염료로 균일하게 덮입니다.

(4) 37°C의 어두운 곳에서 5-30분 동안 배양합니다. 다양한 세포에 대한 최적의 배양 시간은 다르고 구체적인 실험 필요에 따라 스스로 탐색해 주시기 바랍니다.

(5) 배양 후 염료 작업 용액을 버리고 미리 데우긴 배양액으로 슬라이드를 2-3번 세척합니다.

4.현미경 탐지: BODIPY 505/515의 최대 자극/발산광은 각각 505/515 nm입니다.

주의사항:

① 양성 대조그룹을 설정하는 것이 추천됩니다. 대조 그룹의 세포는 후속 실험을 진행하기 전에 30 μM oleic로 8시간 동안 배양되어야 합니다;

② 모든 형광염료는 빛을 받으면 꺼트려질 수 있습니다. 빛을 피하도록 합니다;

③ 당신의 안전과 건강을 위해 실험복과 일회용 장갑을 착용하시기 바랍니다.