N4-Methyl-dCTP |
Catalog No.GB20062
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N4-Methyl-dCTP(N4me-dCTP)는 PCR에서 DNA나 RNA 합성을 위해 사용되는 디옥시티딘 5'-triphosphate (dCTP)의 유사체이다.
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Cas No.: 149674-24-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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N4-Methyl-dCTP(N4me-dCTP)는 PCR에서 DNA나 RNA 합성을 위해 사용되는 디옥시티딘 5'-triphosphate (dCTP)의 유사체이다. N4-Methyl-dCTP는 일부 세균에서 자연적으로 존재한다[2]. N4-Methyl-dCTP(200µM)는 GC 부유 지역에서의 DNA 합성 출력을 향상시킨다[1]. 그리고 N4-Methyl-dCTP는 프라이머 앤일링을 방해하는 강력한 이차 구조를 극복하기 때문에SNP 탐지에서 폴리머라제에 의해 더 잘 받아들여진다[3][4].
References:
[1] Flores-Juárez, Cyntia R et al. “PCR amplification of GC-rich DNA regions using the nucleotide analog N4-methyl-2'-deoxycytidine 5'-triphosphate.” *BioTechniques* vol. 61,4 175-182. 1 Oct. 2016, doi:10.2144/000114457
[2] Ehrlich, M et al. “DNA methylation in thermophilic bacteria: N4-methylcytosine, 5-methylcytosine, and N6-methyladenine.” *Nucleic acids research* vol. 13,4 (1985): 1399-412. doi:10.1093/nar/13.4.1399
[3] Yang, Zunyi et al. “Eliminating primer dimers and improving SNP detection using self-avoiding molecular recognition systems.” *Biology methods & protocols* vol. 5,1 bpaa004. 10 Feb. 2020, doi:10.1093/biomethods/bpaa004
[4]Swenson, Stephanie J, and Birgit Gemeinholzer. “Testing the effect of pollen exine rupture on metabarcoding with Illumina sequencing.” *PloS one* vol. 16,2 e0245611. 2 Feb. 2021, doi:10.1371/journal.pone.0245611
N4-Methyl-dCTP를 사용한 GC 부유 DNA 영역의 PCR 증폭[1]
1. 프라이머 설계:
Integrated DNA Technologies의 PrimerQuest 프로그램을 사용하고 프라이머를 설계합니다. N4meC을 함유하는 DNA 템플릿에서 프라이머와 교잡 온도가 감소하는 것을 최소화하기 위해 프라이머 서열에서 가능한 가장 적은 수의 구아닌을 포함하도록 선택합니다.
2. PCR 절차:
2.1 PCR 혼합물 준비:인간 유전체 DNA 30ng각 프라이머 0.5µMPCR 버퍼(50µM KCl; 10µM Tris-HCl; pH=8.3)각 탈옥시리보핵간산(dATP, dGTP, dTTP, dCTP) ;200µM 또는 수정된 증폭편의 경우 dCTP 대신 200µM N4me-dCTP; 1.5U HotStart Taq DNA 중합효소;2. 5 µM MgCl2;그리고 최종 농도 0.4×의 SYBR Green I.
2.2 사이클링 프로토콜:95°C에서 1분;그리고 95°C에서 30초, 62°C, 64°C 또는 66°C에서 30초, 72°C에서 60초를 45회 반복;마지막으로 72°C에서 4분간 연장.
이 프로토콜은 단지 가이드라인을 제공하고 필요에 따라 수정하시키 바랍니다.
[1]Flores-Juárez, Cyntia R et al. “PCR amplification of GC-rich DNA regions using the nucleotide analog N4-methyl-2'-deoxycytidine 5'-triphosphate.” BioTechniques vol. 61,4 175-182. 1 Oct. 2016, doi:10.2144/000114457
| Cas No. | 149674-24-8 | SDF | |
| Formula | C10H18N3O13P3 (free acid) | M.Wt | 481.1 (free acid) |
| Solubility | Storage | Store at -20°C or below | |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.0786 mL | 10.3928 mL | 20.7857 mL |
| 5 mM | 415.7 μL | 2.0786 mL | 4.1571 mL |
| 10 mM | 207.9 μL | 1.0393 mL | 2.0786 mL |
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.50% Appearance: A solution
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)