DSP (Synonyms: 3,3′-Dithiodipropionic acid di) |
Catalog No.GC18378
One-Click Copy Product Info
|
DSP, un reticulante homofuncional que reacciona con grupos amino como la lisina, y es ampliamente utilizado para la funcionalización de la superficie, es el enlazador preferido para inmovilizar enzimas y anticuerpos en superficies de oro
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 57757-57-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
_1-3.$$$39978408@51.jpg');)
_1-9.$$$38538795@65.jpg');)
_1-9.$$$39112701@51.jpg');)
_1-7.$$$37316672@70.jpg');)
_366-372.$$$36198801@70.jpg');)
.$$$38565142@65.jpg');)
_1867-1883.$$$33248023@67.jpg');)
_eads6055.$$$39977546@45.jpg');)
_eadm9805.$$$40080571@45.jpg');)
_eadj3020.$$$39666821@45.jpg');)
_1-20.$$$39757301@28.jpg');)
_1-24.$$$38898113@28.jpg');)
_273-287.$$$36806353@46.jpg');)
_1-16.$$$37156877@44.jpg');)
_1-19.$$$37460805@44.jpg');)
_1291-1307.$$$34518654@46.jpg');)
DSP, un reticulante homofuncional que reacciona con grupos amino como la lisina, y es ampliamente utilizado para la funcionalización de la superficie, es el enlazador preferido para inmovilizar enzimas y anticuerpos en superficies de oro [1-3]. DSP tiene un punte de disulfuro dentro de su estructura, que se divide al unirse al oro[2]. Al inmovilizar el DSP en una película delgada de oro (GTF), dopamine (DA) se puede capturar selectivamente a través de la reacción específica entre su amina primaria y el éster NHS de DSP, lo que permite la detección sensible de DA en muestras de líquido cefalorraquídeo (CSF) humano[4-5]. DSP se puede emplear en procedimimientos de biotinilación irreversible (IBP) para eliminar la interferencia de los enlaces disulfuro intermoleculares durante la detección de la nitrosación S[6]. DSP también se puede utilizar para aislar complejos de proteínas dñebiles y para preparar películas delgadas de Au-TiO2 para experimentos de inmunoensayo[3, 7].
References:
[1] Darder M, Takada K, Pariente F, et al. Dithiobissuccinimidyl propionate as an anchor for assembling peroxidases at electrodes surfaces and its application in a H2O2 biosensor. Anal Chem. 1999;71(24):5530-5537
[2] Ataman Sadık D, Boyacı İH, et al. Mixed monolayer decorated SPR sensing surface for thrombin detection. J Pharm Biomed Anal. 2019;176:112822.
[3] Akaki K, Mino T, Takeuchi O. DSP-crosslinking and Immunoprecipitation to Isolate Weak Protein Complex. Bio Protoc. 2022;12(15):e4478.
[4] Zhang K, Liu Y, Wang Y, et al. Quantitative SERS Detection of Dopamine in Cerebrospinal Fluid by Dual-Recognition-Induced Hot Spot Generation. ACS Appl Mater Interfaces. 2018;10(18):15388-15394.
[5] Gu H, Guo Y, Xiao X, et al. Double molecular recognition strategy based on boronic acid-diol and NHS ester-amine for selective electrochemical detection of cerebral dopamine. Anal Bioanal Chem. 2020;412(15):3727-3736.
[6] Huang B, Chen C. Detection of protein S-nitrosation using irreversible biotinylation procedures (IBP). Free Radic Biol Med. 2010;49(3):447-456.
[7] Meira DI, Barbosac AI, Proença M, et al. Immobilizing antibody biorecognition layers on Au–TiO2 thin films: direct (physisorption) vs. DSP-crosslinking (chemisorption) surface functionalization. Journal of Physics D: Applied Physics. 2024;415401.
Este plan solo proporciona una guía, por favor modifíquela para satisfacer sus necesidades específicas.
(1) Reticulación DSP e inmunoprecipitación para aislar el complejo de proteínas débiles[1]:
A. Preparación de células que expresan proteínas de interés (POI)
1. Placa de 8,0×105 celdas HeLa en un plato de 10 cm por muestra (10 ml de DMEM que contiene un 10% de FBS por plato).
2. Incubar las células a 37 °C, 5% de CO2 durante 24 horas.
3. Plásmidos transfectos para la expresión de POI etiquetada con FLAG-HA.
4. Incube las células a 37 °C, 5% de CO2 durante la noche.
B. Preparación del búfer de lavado y del búfer IP
1. El día de la reticulación DSP y la inmunoprecipitación, prepare el tampón de lavado y el búfer IP antes de la reticulación. Mantenlos en el hielo.
C. Eslabones cruzados DSP
1. Prepare un DSP de 100 mM justo antes de la reticulación DSP.
2. Diluya 100mM DSP a 0,1mM DSP en PBS precalentado (37°C).
3. Enjuague los platos dos veces con 5 ml de PBS/plato precalentado (37 °C).
4. Deseche el PBS de los platos.
5. Agregue 5 ml de 0,1 mM de DSP (preparado en el paso C2) en cada plato.
6. Incubar los platos a 37 °C durante 30 minutos en una incubadora de CO2.
D. Preparando cuentas para la primera IP
1. Durante la reticulación DSP (paso C6), prepare 40 μL de Dynabeads Protein G/sample en un tubo de 1,5 ml.
2. Lave la proteína Dynabeads G con la misma cantidad de tampón de lavado tres veces: coloque el tubo que contiene Dynabeads Protein G en un soporte magnético y dete que las cuentas se acumulen en el imán. Deseche el sobrenadante con una pipeta. Agregue el tampón de lavado helado. Retire el tubo del soporte magnético. Resuspende las cuentas pipeteando hacia arriba y hacia abajo. Repita el paso D2 dos veces más.
3. Pon el tubo que contiene las cuentas lavadas en un soporte magnético y desecha el sobrenadante.
4. Resuspende las cuentas con un búfer de IP helado.
5. Agregue 1 μL de anticuerpos anti-FLAG por muestra.
6. Incube las cuentas en una incubadora giratoria a 4 °C durante 1 hora.
E. Detener la reticulación DSP
1. Después de la incubación de 30 minutos en el paso C6, deseche el DSP de 0,1 mM y enjuague los platos una vez con 5 ml de PBS/plato precalentado (37 °C).
2. Deseche el PBS y agregue 5 ml de solución STOP (temperatura ambiente)/plato.
3. Incube los platos a temperatura ambiente durante 15 minutos.
F. Primera IP
1. Deseche la solución STOP de los platos.
2. Enjuague los platos dos veces con 5 ml de PBS/plato helado.
3. Deseche el PBS de los platos.
4. Agregue 500 μL de tampón/plato IP helado.
5. Raspe las celdas con un raspador y transfiéralas con todo el tampón IP en el plato a un tubo de 1,5 ml.
6. Resuspende las células pipeteando hacia arriba y hacia abajo.
7. Incubar los tubos sobre hielo durante 10 minutos para completar la lisis celular.
8. Centrifuga los tubos que contienen los lisados a 20.000×g a 4°C durante 5 minutos.
9. Transfiera 500 μL del sobrenadante a un nuevo tubo de 1,5 ml para IP.
10. Agregue 40 μL de perlas unidas a anticuerpos anti-FLAG (preparadas en el paso D6) en el tubo que contiene el sobrenadante.
11. Incubar los tubos en una incubadora giratoria a 4 °C durante 2 horas.
G. Preparación de cuentas para la segunda IP
1. Aproximadamente 30 minutos antes de terminar la incubación de 2 horas en el paso F11, prepare y lave la nueva proteína G de Dynabeads, como en los pasos D1 a D4.
2. Agregue 1 μL de anticuerpos anti-HA por muestra.
3. Incube las cuentas en una incubadora giratoria a 4 °C durante 1 hora.
H. Elución de proteínas con péptidos FLAG
1. Prepare el tampón de elución FLAG diluyendo la solución de caldo de péptido FLAG con TBS y manténgalo en hielo.
2. Después de la incubación de 2 horas en el paso F11, lave las cuentas con 700 μL de tampón de lavado helado tres veces.
3. Deseche el tampón de lavado de las cuentas.
4. Vuelva a suspender las cuentas con 100 μL de tampón de elución FLAG (preparado en el paso H1) suavemente pipeteando hacia arriba y hacia abajo.
5. Incube las cuentas con tampón de elución FLAG en una incubadora giratoria a 4 °C durante 10 minutos.
6. Configure los tubos en un soporte magnético y transfiera el sobrenadante (que contiene POI y proteínas unidas a POI) a nuevos tubos de 1,5 ml.
7. Repita los pasos H4 a H5 una vez más.
8. Configure los tubos en un soporte magnético y transfiera el sobrenadante a los tubos que contienen las primeras proteínas elutadas en el paso H6.
9. Agregue 300 μL de tampón IP helado al sobrenadante recogido.
Yo. Segunda IP
1. Mezcle los 500 μL de sobrenadante en el paso H9 con 40 μL de perlas anti-HA unidos a los anticuerpos (preparadas en el paso G3).
2. Incube las cuentas en una incubadora giratoria a 4 °C durante 2 horas.
J. Elución final
1. Después de la incubación de 2 horas en el paso I2, lave las cuentas con 700 μL de tampón de lavado helado tres veces.
(2) Tratamiento DSP de lisados del cerebro del ratón[2]:
1. Los lisados del cerebro del ratón se trataron con DSP 5mM durante 30 minutos para formar enlaces disulfuro intermoleculares, Pr-S-S-Pr in vitro y se detuvieron mediante la adición de tampón Tris.
2. Luego, los lisados se analizaron mediante el método original de cambio de biotina y los procedimientos de biotinilación irreversible (IBP).
(3) Utilice DSP para preparar películas delgadas de Au-TiO2 para experimentos de inmunoensayo[3]:
1. Las películas delgadas de Au-TiO2 activadas por plasma se funcionalizaron con soluciones DSP, utilizando varias concentraciones (0,4, 1, 4 y 10 mg/ml) disueltas en disolvente DMSO (dimetilsulfóxido, anhidro, ≥99,9%).
2. El tiempo de inmovilización fue de 30 minutos, seguido de pasos de limpieza, incluyendo DMSO, PBS (Salina tamponada con fosfato; pH 7,4; 10 mM) y soluciones de etanol al 96% para eliminar cualquier molécula reticulante sin límites.
References:
[1] Akaki K, Mino T, Takeuchi O. DSP-crosslinking and Immunoprecipitation to Isolate Weak Protein Complex. Bio Protoc. 2022;12(15):e4478.
[2] Huang B, Chen C. Detection of protein S-nitrosation using irreversible biotinylation procedures (IBP). Free Radic Biol Med. 2010;49(3):447-456.
[3] Meira DI, Barbosac AI, Proença M, et al. Immobilizing antibody biorecognition layers on Au–TiO2 thin films: direct (physisorption) vs. DSP-crosslinking (chemisorption) surface functionalization. Journal of Physics D: Applied Physics. 2024;415401.
| Cas No. | 57757-57-0 | SDF | |
| Sinónimos | 3,3′-Dithiodipropionic acid di | ||
| Formula | C14H16N2O8S2 | M.Wt | 404.41 |
| Solubility | DMF: 30 mg/ml,DMSO: 30 mg/ml,DMSO:PBS (pH 7.2) (1:4): 0.20 mg/ml | Storage | Store at -20°C, protect from light, stored under nitrogen |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.4727 mL | 12.3637 mL | 24.7274 mL |
| 5 mM | 494.5 μL | 2.4727 mL | 4.9455 mL |
| 10 mM | 247.3 μL | 1.2364 mL | 2.4727 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >97.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 25 reference(s) in Google Scholar.)