DSP (Synonyms: 3,3′-Dithiodipropionic acid di) |
Catalog No.GC18378
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DSP, un agent de réticulation homobifonctionnel qui réagit avec les groupes aminés tels que la lysine et est largement utilisé pour la fonctionnalisation de surface, est l'agent de liaison préféré pour l'immobilisation d'enzymes et d'anticorps sur les surfaces d'or.
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Cas No.: 57757-57-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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DSP, un agent de réticulation homobifonctionnel qui réagit avec les groupes aminés tels que la lysine et est largement utilisé pour la fonctionnalisation de surface, est l'agent de liaison préféré pour l'immobilisation d'enzymes et d'anticorps sur les surfaces d'or[1-3]. DSP possède un pont disulfure au sein de sa structure, qui se clive lors de la liaison à l'or[2]. Au moyenne d'immobiliser DSP sur un film mince d'or (GTF), la dopamine (DA) peut être capturée de manière sélective via la réaction spécifique entre son amine primaire et l'ester NHS de DSP, permettant une détection sensible de DA dans les échantillons de liquide céphalorachidien humain (LCR)[4-5]. DSP peut être utilisé dans les procédures de biotinylation irréversible (IBP) pour éliminer l'interférence des ponts disulfure intermoléculaires lors de la détection de S-nitrosation[6]. DSP peut également être utilisé pour isoler de faibles complexes protéiques et pour préparer des films minces d' Au-TiO2 pour des expériences d'immunodosage[3, 7].
References:
[1] Darder M, Takada K, Pariente F, et al. Dithiobissuccinimidyl propionate as an anchor for assembling peroxidases at electrodes surfaces and its application in a H2O2 biosensor. Anal Chem. 1999;71(24):5530-5537
[2] Ataman Sadık D, Boyacı İH, et al. Mixed monolayer decorated SPR sensing surface for thrombin detection. J Pharm Biomed Anal. 2019;176:112822.
[3] Akaki K, Mino T, Takeuchi O. DSP-crosslinking and Immunoprecipitation to Isolate Weak Protein Complex. Bio Protoc. 2022;12(15):e4478.
[4] Zhang K, Liu Y, Wang Y, et al. Quantitative SERS Detection of Dopamine in Cerebrospinal Fluid by Dual-Recognition-Induced Hot Spot Generation. ACS Appl Mater Interfaces. 2018;10(18):15388-15394.
[5] Gu H, Guo Y, Xiao X, et al. Double molecular recognition strategy based on boronic acid-diol and NHS ester-amine for selective electrochemical detection of cerebral dopamine. Anal Bioanal Chem. 2020;412(15):3727-3736.
[6] Huang B, Chen C. Detection of protein S-nitrosation using irreversible biotinylation procedures (IBP). Free Radic Biol Med. 2010;49(3):447-456.
[7] Meira DI, Barbosac AI, Proença M, et al. Immobilizing antibody biorecognition layers on Au–TiO2 thin films: direct (physisorption) vs. DSP-crosslinking (chemisorption) surface functionalization. Journal of Physics D: Applied Physics. 2024;415401.
Ce plan fournit seulement un guide, veuillez le modifier pour répondre à vos besoins spécifiques.
(1)Liaison par DSP et immunoprécipitation pour isoler un complexe protéique faible[1]:
A. Préparation des cellules exprimant les protéines d'intérêt (POIs)
1.Ensemencer 8.0×105 cellules HeLa dans une boîte de culture de 10cm de diamètre par échantillon (10mL de DMEM contenant 10% de FBS par boîte).
2.Incuber les cellules à 37°C, 5% de CO2 pendant 24 heures.
3.Transfecter des plasmides pour l'expression de PO étiquetées FLAG-HA.
4.Incuber les cellules à 37°C, 5% de CO2 toute la nuit.
B.Préparation du tampon de lavage et du tampon d'IP.
1.Le jour de la liaison par DSP et de l'immunoprécipitation, préparer le tampon de lavage et le tampon d'IP avant la liaison.
2.Garder-les sur de la glace.
C. Liaison par DSP
1.Préparer DSP à 100mM juste avant la liaison de DSP.
2.Diluer DSP à 100mM à 0,1mM dans PBS préchauffé (37°C).
3.Rincer les boîtes deux fois avec 5mL de PBS préchauffé (37°C) par boîte.
4.Eliminer PBS des boîtes.
5.Ajouter 5mL de DSP à 0,1mM (préparé à l'étape C2) dans chaque boîte.
6.Incuber les boîtes à 37°C pendant 30 minutes dans une étuve à CO2.
D.Préparation des billes pour la première IP.
1.Pendant la liaison de DSP (étape C6), préparer 40µL de Dynabeads Protein G par échantillon dans un tube de 1,5mL.
2.Laver les Dynabeads Protein G trois fois avec la même quantité de tampon de lavage : placer le tube contenant les Dynabeads Protein G sur un rapport magnétique et laisser les billes s'accumuler sur l'aimant. Jeter le surnageant avec une pipette. Ajouter du tampon de lavage glacé. Retirer le tube du support magnétique. Résuspendre les billes en pipettant vers le haut et vers le bas. Répéter l'étape D2 deux fois de plus.
3.Placer le tube contenant les billes lavées sur un support magnétique et jeter le surnageant.
4.Résuspendre les billes avec du tampon d'IP glacé.
5.Ajouter 1µL d'anticorps anti-FLAG par échantillon.
6.Incuber les billes dans un incubateur rotatif à 4°C pendant 1h.
E.Arrêt de la liaison de DSP.
1.Après l'incubation de 30 minutes à l'étape C6, jeter DSP à 0,1mM et rincer les boîtes une fois avec 5mL de PBS préchauffé (37°C) par boîte.
2.Jeter PBS et ajouter 5mL de solution STOP (température ambiante) par boîte.
3.Incuber les boîtes à température ambiante pendant 15 minutes.
F.Première IP
1.Jeter la solution STOP des boîtes.
2.Rincer les boîtes deux fois avec 5mL de PBS glacé par boîte.
3.Jeter PBS des boîtes.
4.Ajouter 500µL de tampon d'IP glacé par boîte.
5.Râper les cellules avec un racloir et les transférer avec tout le tampon d'IP de la boîte dans un tube de 1,5mL.
6.Résuspendre les cellules en pipettant vers le haut et vers le bas.
7.Incuber les tubes sur la glace pendant 10 minutes pour terminer la lyse cellulaire.
8.Centrifuger les tubes contenant les lysats à 20 000xg à 4°C pendant 5 minutes.
9.Transférer 500µL du surnageant dans un nouveau tube de 1,5mL pour IP.
10.Ajouter 40µL de billes liées à l'anticorps anti-FLAG (préparées à l'étape D6) dans le tube contenant le surnageant.
11.Incuber les tubes dans un incubateur rotatif à 4°C pendant 2 heures.
G.Préparation des billes pour la seconde IP.
1.Environ 30 minutes avant la fin de l'incubation de 2 heures à l'étape F11, préparer et laver de nouvelles Dynabeads Protein G, comme dans les étapes D1 à D4.
2.Ajouter 1µL d'anticorps anti-HA par échantillon.
3.Incuber les billes dans un incubateur rotatif à 4°C pendant 1 heure.
H.Elution des protéines avec des peptides FLAG
1.Préparer le tampon d'élution FLAG en diluant la solution de stock de peptide FLAG avec TBS et le conserver sur la glace.
2.Après l'incubation de 2 heures à l'étape F11, laver les billes avec 700µl de tampon de lavage glacé trois fois.
3.Jeter le tampon de lavage des billes.
4.Résuspendre les billes avec 100µL de tampon d'élution FLAG (préparé à l'étape H1) délicatement en pipettant vers le haut et vers le bas.
5.Incuber les billes avec le tampon d'élution FLAG dans un incubateur rotatif à 4°C pendant 10 minutes.
6.Placer les tubes sur un support magnétique et transférer le surnageant (contenant POI et les protéines liées à POI) dans de nouveaux tubes de 1,5mL.
7.Répéter les étapes H4 à H5 une fois de plus.
8.Placer les tubes sur un support magnétique et transférer le surnageant dans les tubes contenant les premières protéines éluées à l'étape H6.
9.Ajouter 300µL de tampon d'IL glacé au surnageant collecté.
I.Seconde IP
1.Mélanger 500µL de surnageant à l'étape H9 avec 40µL de billes liées à l'anticorps anti-HA (préparées à l'étape G3).
2.Incuber les billes dans un incubateur rotatif à 4°C pendant 2 heures.
J.Elution finale
1.Après l'incubation de 2 heures à l'étape I2, laver les billes avec 700µl de tampon de lavage glacé trois fois.
(2)Traitement par DSP des lysats de cerveau de rats[2]:
1.Les lysats de cerveau de rats ont été traités avec DSP à 5mM pendant 30 minutes pour former les ponts disufure intermoléculaires, Pr-S-S-Pr in vitro, et le traitement a été arrêté par l'ajout de tampon Tris.
2.Les lysats ont été ensuite analysés par la méthode d'interrupteur biotine originale et des procédures de biotinylation irréversible (IBP).
(3)Utilisation de DSP pour préparer les films minces d' Au-TiO2 pour les expériences d'immunodosage[3]:
1.Des films minces d' Au-TiO2 activés par plasma ont été fonctionnalisés avec des solutions de DSP, en utilisant diverses concentrations (0.4, 1, 4, et 10mg/ml) dissous dans un solvant DMSO (diméthyl-sulfoxyde, anhydre, ≥99.9%).
2.Le temps d'immobilisation était 30 minutes, suivi d'étapes de nettoyag (comprendre DMSO, PBS ( Saline Phosphate-tamponnée; pH 7.4; 10mM), et éthanol) à 96% pour éliminer toutes les molécules d'agent de réticulation non-liées.
References:
[1] Akaki K, Mino T, Takeuchi O. DSP-crosslinking and Immunoprecipitation to Isolate Weak Protein Complex. Bio Protoc. 2022;12(15):e4478.
[2] Huang B, Chen C. Detection of protein S-nitrosation using irreversible biotinylation procedures (IBP). Free Radic Biol Med. 2010;49(3):447-456.
[3] Meira DI, Barbosac AI, Proença M, et al. Immobilizing antibody biorecognition layers on Au–TiO2 thin films: direct (physisorption) vs. DSP-crosslinking (chemisorption) surface functionalization. Journal of Physics D: Applied Physics. 2024;415401.
| Cas No. | 57757-57-0 | SDF | |
| Synonymes | 3,3′-Dithiodipropionic acid di | ||
| Formula | C14H16N2O8S2 | M.Wt | 404.41 |
| Solubility | DMF: 30 mg/ml,DMSO: 30 mg/ml,DMSO:PBS (pH 7.2) (1:4): 0.20 mg/ml | Storage | Store at -20°C, protect from light, stored under nitrogen |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.4727 mL | 12.3637 mL | 24.7274 mL |
| 5 mM | 494.5 μL | 2.4727 mL | 4.9455 mL |
| 10 mM | 247.3 μL | 1.2364 mL | 2.4727 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
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- Purity: >97.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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