ARCA (Synonyms: Anti Reverse Cap Analog, 3´-O-Me-m7G(5')ppp(5')G) |
Catalog No.GC16608
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ARCA est un analogue de coiffe 5' de type anti-inversé.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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ARCA est un analogue de coiffe 5' de type anti-inversé. Au cours de la transcription in vitro, ARCA fait la coiffe se fixer à l'extrémité 5' de mRNA dans la orientation correcte. ARCA assure un rattachement directionel correct à l'extrémité 5' de mRNA, empêche l'incorporation inversée pendant la transcription in vitro, par voie d'introduire un groupe méthyle sur la position 3'-OH de m7G. ARCA améliore l'efficacité de traduction, la stabilité de mRNA. ARCA est utilisé à rechercher le cancer, les maladies infectieuses, les vaccins à mRNA[1-4].
Méthode de préparation de mRNA à structure de coiffe correctement orienté avec ARCA[1]
Ce protocole est fourni uniquement à titre de référence. Veuillez le modifier en fonction de vos besoins spécifiques.
(1)Préparation des réactifs : Dissoudre ARCA dans l'eau ou un tampon adapté à obtenir une solution stock à 0,5mM. Préparer un mélange de NTP contenant 0,5mM d'ATP, 0,5mM de CTP, 0,5mM d'UTP et 0,1mM de GTP (rapport molaire ARCA/GTP égal à 5:1). Préparer RNA polymérase SP6 ou T7, le matrice de DNA, l'inhibiteur de RNase et le tampon de transcription.
(2)Montage du système de réaction de transcription in vitro : Ajouter 600ng de matrice de DNA, 1U/μL d'inhibiteurs de RNase, 0,5mM d'ATP-CTP-UTP, 0,1mM de GTP et 0,5mM d'ARCA au tampon de transcription. Ajouter RNA polymérase SP6 ou T7.
(3)Synthèse de mRNA : Incuber à 37°C pendant une heure. Ajouter 2μL de DNase et poursuivre l'incubation à 37°C pendant 20min pour éliminer la matrice de DNA. Purifier le produit de RNA pour obtenir ARCA à coiffe ARCA avec une orientation correcte.
(4)Vérification de la traduction de mRNA coiffé par ARCA : Transfecter mRNA coiffé par ARCA dans les cellules HEK293 (DMEM+10%FBS; 37°C; 5%CO2), ou ajouter un lysat de réticulocyte de lapin, incuber à 30°C pendant 60min. Evaluer l'efficacité de traduction à l'aide des valeurs de luminescence de la luciférase. Détecter la proportion de mRNA restant dans les cellules HEK293 par RT-qPCR pour évaluer sa stabilité.
Précautions :
(1)Pour éviter la dégradation de RNA, utiliser des consommables sans RNase tout au long de l'expérience et réaliser toutes les opérations sur de la glace.
(2)Pour votre sécurité et votre santé, portez une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant l'opération.
| Cas No. | SDF | ||
| Synonymes | Anti Reverse Cap Analog, 3´-O-Me-m7G(5')ppp(5')G | ||
| Canonical SMILES | OC1C(COP([O-])(OP([O-])(OP([O-])(OCC2OC(N3C=[N+](C)C4=C3N=C(N)NC4=O)C(O)C2OC)=O)=O)=O)OC(N5C=NC6=C5N=C(N)NC6=O)C1O | ||
| Formula | C22H32N10O18P3 (free acid) | M.Wt | 817.4 g/mol (free acid) |
| Solubility | Storage | Store at -20°C | |
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.2234 mL | 6.117 mL | 12.2339 mL |
| 5 mM | 244.7 μL | 1.2234 mL | 2.4468 mL |
| 10 mM | 122.3 μL | 611.7 μL | 1.2234 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A liquid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 31 reference(s) in Google Scholar.)