Acridine Orange (Synonyms: NSC 194350) |
カタログ番号GC41242
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Acridine Orangeは細胞透過性で、核酸選択性の蛍光染料である。核酸と結合する場合、Acridine Orangeは蛍光を放つ：二本鎖DNAに挿入され場合は、緑色の蛍光を発する（励起488nm、発光530nm）。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 494-38-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Acridine Orangeは細胞透過性で、核酸選択性の蛍光染料である。核酸と結合する場合、Acridine Orangeは蛍光を放つ：二本鎖DNAに挿入され場合は、緑色の蛍光を発する（励起488nm、発光530nm）。Acridine OrangeがDNAとRNAとの結合量が異なるため、一本鎖DNAまたはRNAと結合するAcridine Orangeは、オレンジまたは赤い蛍光（励起488nm、発光640nm）を発する。そのため、Acridine Orangeはよく正常、アポトーシス、壊死細胞の区別に使われる[1]。
References：
[1] Ma T, Zhao Y, Cheng X. Detection of dsRNA by Acridine Orange Staining. Methods Mol Biol. 2024;2771:7-12.
このプランはあくまでもガイドであり、ご自分のニーズに合わせてご調整ください。
1.Acridine Orangeの調製
(1)染色溶液：DMSOでAcridine Orange粉末を1mg/mLに溶解する。未使用の貯蔵液を小分けし、−20°Cまたは−4°C、暗所で保存する（窒素下での保存を推奨）；繰り返した冷凍-解凍循環を避けるべき。
(2)作業溶液：貯蔵液を適切な緩衝液（無血清培地、HBSSまたはPBS）で0.5–20μg/mLに希釈する。各実験に対し新鮮なものを調製し、最適濃度になるまで滴定する。
2.懸濁細胞のDNA/RNA染色
（1）細胞を収穫し；氷の上で、~0.2mLのオリジナル懸濁液を2–5mLのチューブに入れる。
（2）0.4mLの氷冷透過緩衝液をゆっくり添加し；氷に約15秒静置する。
（3）1.2mLの氷冷Acridine Orange作業溶液をゆっくり添加する；暗所で、氷の上で2-15分間培養する。
（4）フローサイトメトリーで速やかに分析する：488nmで励起；530nmでdsDNAの緑色の蛍光、640nmでRNA/ssDNAの赤色の発光を収集する（AO核酸複合体は488/650nmでピークに達する）。
3.接着細胞の染色（氷の上）
(1)無菌カバーグラスで細胞を培養する。
(2)培地を除去し、余分なものをブロットし、カバーグラスを湿ったチャンバーに保存する。
(3)100μLのAcridine Orange作業溶液を一角に添加し；ゆっくり傾けてすべての細胞をカバーさせる。暗所で、氷の上で2-15分間培養する。
(4)染色液を吸い出し、新鮮な培地でカバーグラスを2-3回すすぎ、蛍光顕微鏡で観察する。
4.検出
(1)蛍光顕微鏡またはフローサイトメーター：488nmで励起；530nm (dsDNA)で緑色の蛍光を獲得し、640nm (RNA/ssDNA)でオレンジ色の蛍光を獲得する。
注意事項：
(1)固定後、細胞を染色する必要がある場合は、固定に70％のエタノールを使用し、氷で2時間以上固定し、その後は事前冷却のPBSで1-2回すすぎ、すべてのエタノールを除去し、染色については上記のステップに従い行うことを推奨する：
(2)蛍光染料で消光問題があるため、光から避けて、蛍光の消光を遅らせてください；
(3)安全と健康のため、実験時は白衣と使い捨ての手袋を装着してください。
References:
[1] Hu P, Wang J, Qing Y, et al. FV-429 induces autophagy blockage and lysosome-dependent cell death of T-cell malignancies via lysosomal dysregulation. Cell Death Dis. 2021 Jan 13;12(1):80.
| Cas No. | 494-38-2 | SDF | |
| 同義語 | NSC 194350 | ||
| Chemical Name | N3,N3,N6,N6-tetramethyl-3,6-acridinediamine | ||
| Canonical SMILES | CN(C)C1=CC(N=C(C=C(N(C)C)C=C2)C2=C3)=C3C=C1 | ||
| Formula | C17H19N3 | M.Wt | 265.4 |
| 溶解度 | 0.3mg/mL in ethanol, 20mg/mL in DMSO, 2mg/mL in DMF | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.7679 mL | 18.8395 mL | 37.679 mL |
| 5 mM | 753.6 μL | 3.7679 mL | 7.5358 mL |
| 10 mM | 376.8 μL | 1.8839 mL | 3.7679 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >75.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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