製品は研究用途にのみ使用できます。人体には使用できません。患者への販売は行っておりません。
| Pack Size | Price | Availability | Quantity | Action |
|---|---|---|---|---|
| 1g | $28.00 | In Stock | 1 | |
| 5g | $96.00 | In Stock | 1 | |
| 10g | $160.00 | In Stock | 1 | |
| 25g | $368.00 | In Stock | 1 |
Acridine Orangeは細胞透過性で、核酸選択性の蛍光染料である。核酸と結合する場合、Acridine Orangeは蛍光を放つ：二本鎖DNAに挿入され場合は、緑色の蛍光を発する（励起488nm、発光530nm）。Acridine OrangeがDNAとRNAとの結合量が異なるため、一本鎖DNAまたはRNAと結合するAcridine Orangeは、オレンジまたは赤い蛍光（励起488nm、発光640nm）を発する。そのため、Acridine Orangeはよく正常、アポトーシス、壊死細胞の区別に使われる[1]。
References：
[1] Ma T, Zhao Y, Cheng X. Detection of dsRNA by Acridine Orange Staining. Methods Mol Biol. 2024;2771:7-12.
このプランはあくまでもガイドであり、ご自分のニーズに合わせてご調整ください。
1.Acridine Orangeの調製
(1)染色溶液：DMSOでAcridine Orange粉末を1mg/mLに溶解する。未使用の貯蔵液を小分けし、−20°Cまたは−4°C、暗所で保存する（窒素下での保存を推奨）；繰り返した冷凍-解凍循環を避けるべき。
(2)作業溶液：貯蔵液を適切な緩衝液（無血清培地、HBSSまたはPBS）で0.5–20μg/mLに希釈する。各実験に対し新鮮なものを調製し、最適濃度になるまで滴定する。
2.懸濁細胞のDNA/RNA染色
（1）細胞を収穫し；氷の上で、~0.2mLのオリジナル懸濁液を2–5mLのチューブに入れる。
（2）0.4mLの氷冷透過緩衝液をゆっくり添加し；氷に約15秒静置する。
（3）1.2mLの氷冷Acridine Orange作業溶液をゆっくり添加する；暗所で、氷の上で2-15分間培養する。
（4）フローサイトメトリーで速やかに分析する：488nmで励起；530nmでdsDNAの緑色の蛍光、640nmでRNA/ssDNAの赤色の発光を収集する（AO核酸複合体は488/650nmでピークに達する）。
3.接着細胞の染色（氷の上）
(1)無菌カバーグラスで細胞を培養する。
(2)培地を除去し、余分なものをブロットし、カバーグラスを湿ったチャンバーに保存する。
(3)100μLのAcridine Orange作業溶液を一角に添加し；ゆっくり傾けてすべての細胞をカバーさせる。暗所で、氷の上で2-15分間培養する。
(4)染色液を吸い出し、新鮮な培地でカバーグラスを2-3回すすぎ、蛍光顕微鏡で観察する。
4.検出
(1)蛍光顕微鏡またはフローサイトメーター：488nmで励起；530nm (dsDNA)で緑色の蛍光を獲得し、640nm (RNA/ssDNA)でオレンジ色の蛍光を獲得する。
注意事項：
(1)固定後、細胞を染色する必要がある場合は、固定に70％のエタノールを使用し、氷で2時間以上固定し、その後は事前冷却のPBSで1-2回すすぎ、すべてのエタノールを除去し、染色については上記のステップに従い行うことを推奨する：
(2)蛍光染料で消光問題があるため、光から避けて、蛍光の消光を遅らせてください；
(3)安全と健康のため、実験時は白衣と使い捨ての手袋を装着してください。
References:
[1] Hu P, Wang J, Qing Y, et al. FV-429 induces autophagy blockage and lysosome-dependent cell death of T-cell malignancies via lysosomal dysregulation. Cell Death Dis. 2021 Jan 13;12(1):80.
