LDS-751

このプロトコールはあくまでもガイドであり、お客様にはご自分のニーズに合わせてご調整願います。

1.LDS751染色溶液の調製

(1) LDS 751染色貯蔵液の調製：5.297mLのDMSOを使って、25mgのLDS 751を完全に溶解し、10mMの貯蔵液を獲得する。

注：LDS751貯蔵液は、小分けの後、繰り返した冷凍と解凍を避ける為に、暗闇で-20℃で貯蔵することを推奨する。

(2)LDS 751作業溶液の調製：事前加熱した無血清培養基または緩衝液(例えばHBSSまたはPBS)を使って、貯蔵液を薄め、10μMの濃度でLDS 751作業溶液を調製する。

注：実際の条件に応じてLDS751作業溶液の濃度を調整して、使用する前に調製してください。

2.細胞の染色

2.1懸濁細胞（6ウェルプレートを例に挙げて）

(1) 懸濁細胞を1000gで3-5分間遠心分離する。上清を廃棄し、PBSで5分間ずつ、計2回洗浄する。

(2) 1mLのLDS751作業溶液を入れて、暗闇で15-60分、室温で培養する。

(3) 培養の後、1000gで5分間遠心分離し、上清を除去し、PBSで5分間、2-3回洗浄する。

(4) 細胞を無血清の培地またはPBSで再懸濁し、蛍光酵素標識プレートまたはフローサイトメトリーで観察する。

2.2 接着細胞

(1) 接着細胞を無菌カバーガラスに培養する。

(2) 培養基からカバーガラスを除去し、余分な培養液を吸引しカバーガラスを湿った環境で置く。

(3) 100uLのLDS751作業溶液をカバーガラスの一角から入れて、染料が全ての細胞をカバーできるようにゆっくり振って、暗闇で室温で15-60分間培養する。

(4) 色素作業溶液を吸引し、培養基でカバーガラスを二三回洗浄し、蛍光酵素標識プレートまたはフローサイトメトリーで観察する。

3.蛍光ELISAプレートの検出：LDS751の励起/発光光はそれぞれ543/712nmである（DNAと結合する場合）

注：

(1)固定された細胞または組織サンプルを染色する為に、固定後、固定液を濯いで除去する；

(2)蛍光消光を遅らせる為に、抗蛍光消光シーリング剤を使うことを推奨する；

(3)LDS751は人間の体に刺激的である。安全と健康の為には、実験中は白衣と使い捨ての手袋を装着してください。

(4)最初の実験では、複数の染色濃度を試し、最適の作業濃度を決める。より高い濃度は細胞組織の非特定的な染色を起こす可能性がある。