Ac-ANW-AMC (Synonyms: Ac-Ala-Asn-Trp-AMC) |
Catalog No.GC42685
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Ac-ANW-AMC는 20S 면역 프로테아제의 β5i (LMP7/PSMB8)야기의 형광성 기질이고 최대 흡수 파장은 λEx = 345 nm, 최대 방출 파장은 λEm = 445 nm이다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 2357123-49-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Ac-ANW-AMC는 20S 면역 프로테아제의 β5i (LMP7/PSMB8)야기의 형광성 기질이고 최대 흡수 파장은 λEx = 345 nm, 최대 방출 파장은 λEm = 445 nm이다. 특정 효소가 Ac-ANW-AMC에 작용할 때 7-amido-4-methylcoumarin (AMC)이라는 형광 분자를 방출한다. AMC의 형광 강도를 측정함으로써 효소의 활성을 정량적으로 분석할 수 있다 [3]. Ac-ANW-AMC의 형광 신호는 i-proteasome 억제제 ONX-0914에 의해 효과적으로 제거될 수 있다 [4].
References:
[1] Winter M B, La Greca F, Arastu-Kapur S, et al. Immunoproteasome functions explained by divergence in cleavage specificity and regulation[J]. Elife, 2017, 6: e27364.
[2] Erokhov P A, Kulikov A M, Karpova Y D, et al. Proteasomes in patient rectal cancer and different intestine locations: where does proteasome pool change?[J]. Cancers, 2021, 13(5): 1108.
[3] Mustafa M S, El-Abadelah M M, Mubarak M S, et al. Synthesis and fluorogenic properties of some 1-(coumarin-7-yl)-4, 5-dihydro-1, 2, 4-triazin-6 (1H)-ones[J]. International Journal of Chemistry, 2011, 3(4): 89.
[4] Kim S, Park S H, Choi W H, et al. Evaluation of Immunoproteasome-Specific Proteolytic Activity Using Fluorogenic Peptide Substrates[J]. Immune Network, 2022, 22(3).
이 계획은 단지 가이드를 제공하고 특정 필요에 따라 수정하시기 바랍니다.
1.용액 준비
(1) 작업 용액: Ac-ANW-AMC를 DMSO에 녹인 후 시험 버퍼로 필요한 작업 농도로 희석합니다. 예를 들어 30-100μM [1, 2].
노트: 실제 상황에 따라 최적의 작업 농도를 조정하거나 문헌을 참고하고 구배 농도 계단을 설정합니다. 작업 용액은 즉시 준비하고 즉시 사용해야 합니다.
2. Ac-ANW-AMC의 수해율을 시간에 따라 관찰하고 β5i의 촉매 활성을 측정합니다[1](문헌에서 가져온 것으로 참고용만 합니다).
(1) 분해 완충액을 사용하고 단백질 염출액을 준비하고 20S 프로테아제 측정 완충액(20 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA, 0.035% SDS, pH 8.0)로 희석합니다.
(2) β5i의 촉매 반응을 시작하기 위해 100μM의 Ac-ANW-AMC를 추가합니다.
(3) 360 nm의 흥분 파장과 460 nm의 방출 파장을 사용하고 마이크로플레이트 리더로 형광 신호를 측정하고 1시간 동안 1분마다 한 번씩 측정합니다.
3. Ac-ANW-AMC를 사용한 프로테아좀 LMP7 활성을 측정합니다[2](문헌에서 가져온 것으로 참고용만 합니다)
(1) 반응 혼합물은 20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 30μM Ac-ANW-AMC, 1 mM 디티오들글리톨(DTT), 5 mM MgCl₂ 그리고 1 mM ATP를 포함하고 있습니다.
(2) 비-프로테아좀 단백 분해 활성의 기여도를 계산하기 위해 7μM MG132(프로테아좀 억제제)를 사용했습니다. 0.5, 1.0, 1.5 그리고 2.0μL의 정제된 혼합액을 총 부피 100μL로 추가한 후 반응을 37°C에서 20분간 배양하고 1% SDS로 반응을 종료시켰습니다.
(3) 380 nm의 흥분 파장과 440 nm의 방출 파장을 가진 형광계로 생성물을 검출했습니다. 전체 활성과 MG132 존재시 잔여 활성의 차이를 프로테아제 활성으로 결정했습니다.
참조 문헌:
[1] Lee M J, Miller Z, Park J E, et al. H727 cells are inherently resistant to the proteasome inhibitor carfilzomib, yet require proteasome activity for cell survival and growth[J]. Scientific reports, 2019, 9(1): 4089.
[2] Erokhov P A, Kulikov A M, Karpova Y D, et al. Proteasomes in patient rectal cancer and different intestine locations: where does proteasome pool change?[J]. Cancers, 2021, 13(5): 1108.
| Cas No. | 2357123-49-8 | SDF | |
| Synonyms | Ac-Ala-Asn-Trp-AMC | ||
| Chemical Name | (S)-N1-((S)-3-(1H-indol-3-yl)-1-((4-methyl-2-oxo-2H-chromen-7-yl)amino)-1-oxopropan-2-yl)-2-((S)-2-acetamidopropanamido)succinamide | ||
| Canonical SMILES | O=C1C=C(C)C2=C(C=C(NC([C@H](CC3=CNC4=C3C=CC=C4)NC([C@H](CC(N)=O)NC([C@H](C)NC(C)=O)=O)=O)=O)C=C2)O1 | ||
| Formula | C30H32N6O7 | M.Wt | 588.6 |
| Solubility | 10mM in DMSO | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.6989 mL | 8.4947 mL | 16.9895 mL |
| 5 mM | 339.8 μL | 1.6989 mL | 3.3979 mL |
| 10 mM | 169.9 μL | 849.5 μL | 1.6989 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >95.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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