Boc-LRR-AMC (Synonyms: Boc-Leu-Arg-Arg-AMC, Boc-Leu-Arg-Arg-7-amido-4-Methylcoumarin) |
Catalog No.GC42958
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Boc-LRR-AMC는 트립신을 위한 형광성 기질이고 20S 프로테아좀과 유사한다.
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Cas No.: 109358-46-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Boc-LRR-AMC는 트립신을 위한 형광성 기질이고 20S 프로테아좀과 유사한다. Boc-LRR-AMC는 26S 프로테아좀이나 20S 프로테아제의 핵심에서 트립신 유사 활성을 검출하는데 사용할 수 있다. Boc-LRR-AMC의 검출 파장은 380 nm/460 nm이다[1].
References:
[1]. Gruba N, Wysocka M, Brzezińska M, et al. Bladder cancer detection using a peptide substrate of the 20S proteasome[J]. The FEBS journal, 2016, 283(15): 2929-2948.
프로테아솜 검사 캡처를 위한CAPA (문헌에서, 필요에 따라 수정하십시오)[1][2].
1.항체 코팅 : 5µg/ml의 대상 항체를 준비하고 검은색 96웰 MaxiSorp 판을 코팅하고 2% BSA를 함유한 PBS로 1시간 동안 추가로 블로킹합니다.
2. 프로테아제 포착 : 세포 덩어리를 PBS로 세척하고 세포 밀도를 10⁷세포/ml로 하고 냉각된 상태에서 후속 분해 완충액 (50 mM TRIS, 0.1% NP40, pH 7.5)에서 세포를 파괴했습니다. 상청액을 모아 BCA 단백질 분석 시약을 사용해 분석하고 단백질 농도를 용해 버퍼 중 200 µg/ml로 조정했습니다. 각 웰에 50 µl의 세포 추출물이 추가되었고 플레이트는 4°C에서 2시간 동안 배양되었습니다.정량ELISA 분석을 통해 각 웰당 포획된 프로테아좀의 양은 약 200ng으로 조정되었습니다[3].
3. 기질 배양 : 프로테아좀을 포획한 후 판을 먼저 20 mM트리스 버퍼(0.1% NP40을 함유하고 있고 pH 7.5)로 신중하게 세척하고20 mM Tris 버퍼(pH 7.5)로 세척하고 과잉물질을 제거합니다. 이후에 20 mM 트리스 버퍼(pH 7.5)로 희석된 프로테아솜 억제제를 웰에 추가하고 실온에서 10분 동안 회전하고 배양합니다. 마지막으로 형광 기질 Boc-LRR-AMC를 20 mM 트리스 버퍼로 희석하고 100 µM의 농도로 웰에 추가합니다.
4. 형광 검출 : 판을 플라스틱 커버로 밀봉하고 37°C에서 약 30분 동안 배양했습니다. 이 후에 Proteasome-GloMAX 또는 SpectraMax 190 마이크로플레이트 리더를 사용하고 흥분 파장 380 nm와 방출 파장 460 nm에서 형광 값을 측정했습니다.
References:
[1]. Vigneron N, Abi Habib J, Van den Eynde B J. The capture proteasome assay (CAPA) to evaluate subtype-specific proteasome inhibitors[J]. Data in Brief, 2015, 4: 146-151.
[2]. Vigneron N, Abi Habib J, Van den Eynde B J. The capture proteasome assay: a method to measure proteasome activity in vitro[J]. Analytical biochemistry, 2015, 482: 7-15.
[3]. Guillaume B, Chapiro J, Stroobant V, et al. Two abundant proteasome subtypes that uniquely process some antigens presented by HLA class I molecules[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010, 107(43): 18599-18604.
| Cas No. | 109358-46-5 | SDF | |
| Synonyms | Boc-Leu-Arg-Arg-AMC, Boc-Leu-Arg-Arg-7-amido-4-Methylcoumarin | ||
| Canonical SMILES | O=C1C=C(C)C2=C(C=C(NC([C@H](CCCNC(N)=N)NC([C@H](CCCNC(N)=N)NC([C@H](CC(C)C)NC(OC(C)(C)C)=O)=O)=O)=O)C=C2)O1 | ||
| Formula | C33H52N10O7 | M.Wt | 700.8 |
| Solubility | DMF: 14 mg/ml,DMSO: 12 mg/ml,Ethanol: 10 mg/ml,PBS (pH 7.2): 1 mg/ml | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.4269 mL | 7.1347 mL | 14.2694 mL |
| 5 mM | 285.4 μL | 1.4269 mL | 2.8539 mL |
| 10 mM | 142.7 μL | 713.5 μL | 1.4269 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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