Filipin Complex (Synonyms: U-5956) |
Catalog No.GC18406
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El Filipin Complex es un polieno neutro, que posee actividad antifúngica.
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Cas No.: 11078-21-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
El Filipin Complex es un polieno neutro, que posee actividad antifúngica. Como compuesto fluorescente, el Filipin Complex se puede utilizar para la imagenología de esteroles en estructuras biológicas etiquetadas, con valores de excitación/emisión de 338/480 nm[1, 4]. El Filipin III (HY-N6718) es el componente principal del Filipin Complex, que está compuesto por cuatro partes[3]. Se encontró que la interacción del Filipin Complex con los esteroides está relacionada tanto con el grupo funcional en la posición 3 como con la cadena alifática del esteroide[7].
Las células fueron pretratadas con 1 y 5 g/mL de Filipin Complex durante 1 hora y luego infectadas con IPNV a un MOI de 1 durante 1 hora. Después de 12 horas de incubación en presencia del fármaco, la expresión de IPNV VP2/VP3 se reveló mediante inmunofluorescencia. No se observó ningún efecto en la infección viral[2]. El Filipin Complex puede unirse a varios esteroles en soluciones acuosas y membranas celulares fúngicas, especialmente al 24α-metilcolesterol, 24α-etilcolesterol y colesterol, induciendo la formación de depresiones en la membrana y el escape del contenido celular[5]. El Filipin Complex puede inhibir el crecimiento celular y el transporte terminal de electrones mitocondriales en Saccharomyces cerevisiae[6].
References:
[1]. Castanho MA, Coutinho A, et,al.Absorption and fluorescence spectra of polyene antibiotics in the presence of cholesterol. J Biol Chem. 1992 Jan 5;267(1):204-9. PMID: 1730589
[2]. Levican J, Miranda-CÁrdenas C, et,al. Infectious pancreatic necrosis virus enters CHSE-214 cells via macropinocytosis. Sci Rep. 2017 Jun 8;7(1):3068. doi: 10.1038/s41598-017-03036-w. PMID: 28596575; PMCID: PMC5465193.
[3]. Payero TD, Vicente CM, et,al. Functional analysis of filipin tailoring genes from Streptomyces filipinensis reveals alternative routes in filipin III biosynthesis and yields bioactive derivatives. Microb Cell Fact. 2015 Aug 7;14:114. doi: 10.1186/s12934-015-0307-4. PMID: 26246267; PMCID: PMC4527110.
[4]. KÜhnl A, Musiol A,et,al.Late Endosomal/Lysosomal Cholesterol Accumulation Is a Host Cell-Protective Mechanism Inhibiting Endosomal Escape of Influenza A Virus. mBio. 2018 Jul 24;9(4):e01345-18. doi: 10.1128/mBio.01345-18. PMID: 30042202; PMCID: PMC6058292.
[5]. Kitajima Y, Sekiya T,et,al. Freeze-fracture ultrastructural alterations induced by filipin, pimaricin, nystatin and amphotericin B in the plasmia membranes of Epidermophyton, Saccharomyces and red complex-induced membrane lesions. Biochim Biophys Acta. 1976 Dec 2;455(2):452-65. doi: 10.1016/0005-2736(76)90317-5. PMID: 793632.
[6]. SHAW PD, ALLAM AM,et,al. EFFECT OF FILIPIN ON THE TERMINAL ELECTRON TRANSPORT SYSTEM OF SACCHAROMYCES CEREVISIAE. Biochim Biophys Acta. 1964 Jul 8;89:33-41. doi: 10.1016/0926-6569(64)90098-7. PMID: 14213010.
[7]. Kleinschmidt MG, Chough KS. Effect of filipin on liposomes prepared with different types of steroids. Plant Physiol. 1972 May;49(5):852-6. doi: 10.1104/pp.49.5.852. PMID: 16658060; PMCID: PMC366064.
Este plan solo proporciona una guía, por favor modifíquelo para adaptarlo a sus necesidades específicas.
1. Preparación de la solución de tinción
(1) Solución madre: Utilice DMSO o etanol absoluto para disolver Filipin y prepare una solución madre con una concentración de 1-5mM.
Nota: La solución madre no utilizada debe ser alicuotada y almacenada en la oscuridad a -20°C o -80°C para evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
(2) Solución de trabajo: Utilice un tampón adecuado (como medio sin suero o PBS) para diluir la solución madre y preparar una solución de trabajo de tinción con una concentración de 1-250μM.
Nota: Ajuste la concentración de la solución de trabajo según la situación real y prepárela en el momento.
2. Tinción de suspensión celular
(1) Células en suspensión: Recoger las células, centrifugar a 1000g durante 3-5 minutos, desechar el sobrenadante y lavar dos veces con PBS durante unos 5 minutos cada vez.
(2) Células adherentes: Lavar las células dos veces con PBS, agregar tripsina para digerir las células y centrifugar a 1000g durante 3-5 minutos después de completar la digestión.
(3) Añadir 1 mL de la solución de trabajo de tinción para resuspender aproximadamente 5-10x10^5 células e incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 15-30 minutos.
Nota: El tiempo óptimo de incubación varía según el tipo de células; explore según las necesidades específicas del experimento.
(4) Después de la incubación, centrifugar a 1000g durante 5 minutos, eliminar el sobrenadante, agregar PBS y lavar 2-3 veces, 5 minutos cada vez.
(5) Resuspender las células en medio de cultivo celular sin suero precalentado o en PBS. Observe bajo microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
3. Tinción de células adherentes
(1) Cultivar células adherentes en cubreobjetos estériles.
(2) Retirar el cubreobjetos del medio de cultivo, aspirar el exceso de medio y colocar el cubreobjetos en un ambiente húmedo.
(3) Añadir 100 μL de la solución de trabajo de tinción desde una esquina del cubreobjetos y agitar suavemente para cubrir uniformemente todas las células con el tinte.
(4) Incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 15-30 minutos.
Nota: El tiempo óptimo de incubación varía según el tipo de células; explore según las necesidades específicas del experimento.
(5) Después de la incubación, desechar la solución de tinción y lavar el cubreobjetos 2-3 veces con PBS.
4. Detección por microscopio: La longitud de onda máxima de excitación/emisión de Filipin es 380/430nm.
Precauciones:
1. Después de la tinción con el tinte Filipin, el blanqueo por fotodegradación de la muestra es muy rápido. Se recomienda realizar la prueba inmediatamente después de la tinción.
2. Los tintes fluorescentes corren el riesgo de apagarse, por lo que se debe tener cuidado de evitar la exposición a la luz durante su uso.
3. Por su seguridad y salud, use bata de laboratorio y guantes desechables.
| Cas No. | 11078-21-0 | SDF | |
| Sinónimos | U-5956 | ||
| Canonical SMILES | N/A | ||
| Formula | C35H58O11 (for Filipin III) | M.Wt | 654.8 |
| Solubility | DMSO : ≥ 100 mg/mL; Ethanol : 10 mg/mL (ultrasonic and warming and heat to 60°C) | Storage | Store at -20°C,protect from light |
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.5272 mL | 7.6359 mL | 15.2718 mL |
| 5 mM | 305.4 μL | 1.5272 mL | 3.0544 mL |
| 10 mM | 152.7 μL | 763.6 μL | 1.5272 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 5 reference(s) in Google Scholar.)