Filipin Complex (Synonyms: U-5956)

このプランはガイドのみを提供し、ご自分の具体的なニーズに合わせてご調整願います。

1.染色溶液の調製

（1）原液の調製：凍結乾燥固形物を室温で少なくとも20分間平衡化する。チューブを遠心分離し、チューブの底で粉末を濃縮する。無水DMSOまたは無水エタノールで、Filipin Complexをクリーンベンチで溶解して、濃度が1-10mMの原液を調製する。

注意事項：Filipin Complex溶液の光と空気に対する感受性は非常に高い。調製された原液を小分けし、不活性ガスで充填することを推奨する。暗所、-20℃または-80℃で、原液を保存して、繰り返された冷凍と解凍を避ける。

（2）作業溶液の調製：適切な緩衝液（PBS、HBSSまたはその他の生理緩衝液など）で原液を希釈し、濃度が1-250μMの作業溶液を調製する。

注：実際の状況に応じて作業溶液の濃度を調節し、使用する直前に調製して下さい。

2.細胞の染色

（1）培養培地の吸収後、細胞をPBSで2-3回洗浄した。

（2）室温で、細胞を4% Paraformaldehydeで15-20分間固定した。

（3）固定後、PBSで1回に5分間、2-3回洗浄する。

（4）Filipin Complex作業溶液を培養孔に添加し、細胞を完全にカバーし、遮光して室温で30分間-2時間インキュベートする。異なる細胞に対する最適なインキュベーション時間は異なるため、具体的な実験ニーズと染色効果に合わせてご自分でご検討願います。

（5）インキュベーションの終わりに、染料作業溶液を吸収し廃棄し、細胞をPBSで2-3回洗浄する。

3.組織切片の染色（凍結切片）：

（1）切片を風通しのいい場所に置き、室温で20-30分間乾燥させる。

（2）スライスを4% Paraformaldehydeに浸し、室温で30分間固定する。

（3）固定溶液を注意深く吸収して廃棄し、切片をPBSで毎回5分間、2-3回洗浄する。

（4）Filipin Complex作業溶液を切片に滴下し、切片を完全に覆い、室温で遮光して30分間-2時間インキュベートする。実際の状況に応じて染色条件を調整する。

（5）インキュベーションの終わりに、染色作業溶液を吸収して廃棄し、細胞をPBSで2-3回洗浄する。

（6）切片を封入する必要があれば、水性蛍光封入剤の使用を推奨する。

4.顕微鏡による検出：Filipinの最大の励起/発光波長は380/430nmである。

注意事項：

1.Filipin Complexは、コレステロールとの結合にして非常に高い親和性を持っているものの、快速な光退色という性質をも持っている。染色の直後に観察することを推奨する。

2.Filipin ComplexはUV励起下では中等程度の自然蛍光しか発せず、その蛍光強度は、その他の蛍光プローブに比べてより弱い。共焦点顕微鏡で観察する時にこの点にについて注意を払う必要がある。

3.蛍光染料には全て消光の問題があるので、蛍光の消光を遅らせるためには、使用中は光からできる限り避けて下さい。

4.ご自分の安全と健康の為に、操作時は白衣と使い捨ての手袋をご着用願います。