Laurdan

Este plan solo proporciona una guía, modifíquela para satisfacer sus necesidades específicas.

1. Preparación solution

(1) Solución de almacenamiento: Disuelva Laurdan en DMSO o cloroformo a una concentración final de 5 mM.

Nota: Después de que se aliquote la solución de almacenamiento no utilizada, guárdela a -20℃ en los oscuridad para evitar la congelación y descongelación repetidas.

(2)Solución de trabajo: Diluya la solución de almacenamiento con tampón experimental (por ejemplo, medio de cultivo celular) a la concentración de trabajo requerida, generalmente en el rango de 1-10 µM.

Nota: Por favor, ajuste la concentración de trabajo óptima de acuerdo con la situación real o consulte la literatura para establecer la concentración de gradiente usted mismo. La solución de trabajo debe prepararse y usarse de inmediato.

2. Pasos para medir la polarización generalizada (GP) de la membrana celular de Bacillus subtilis por Laurdan [1] (de la literatura, solo para referencia)

(1) Tratamiento celular: Cultivar células hasta la mitad de la fase de crecimiento logarítmico, lavarlas cuatro veces en PBS que contiene 2% de glucosae y 1% de DMF, resuspenderlas en el mismo tampón y ajustar el OD600 a 0.3.

(2) Preparación de liposome: El extracto de lípido polar de Bacillus subtilis se preparó mediante diálisis detergente, y la solución de liposoma preparada se exprimió a través de una membrana de filtro de 0.4μm 20 veces. La solución de caldo de liposoma de 10mg/ml se diluyó a una concentración de 1 mg/ml con tampón Tris (5mM, pH 7.4).

(3) Etiquetado de Liposome: Agregue la solución de Laurdan a la suspensión celular hasta una concentración final de 10 μM e incube en la oscuridad durante 30 minutos.

(4)Medición de Fluorescence: La medición de Laurdan fluorescence se realizó utilizando un lector de placas BioTek Synergy MX.La longitud de onda de la excitación fue 350 nm, las longitudes de onda de emisión fueron de 460 nm y 500 nm, y las lecturas se tomaron cada 2 minutos.

(5)Calculo de la polarización por flurescencia de Laurdan: El valor de polarización generalizada (GP) de Laurdan se calculó utilizando la siguiente fórmula: (I460-I500)/(I460+I500).

Nota: Este protocolo experimental solo proporciona una referencia para un experimento de medición de polarización generalizada (GP) de Laurdan de la membrana celular. Por favor, modifique la concentración de trabajo y el tiempo de teñido de acuerdo con las necesidades experimentales o consulte la literatura.

References:
[1]Saeloh D, Tipmanee V, Jim K K, et al. The novel antibiotic rhodomyrtone traps membrane proteins in vesicles with increased fluidity[J]. PLoS pathogens, 2018, 14(2): e1006876.

Cas No.	74515-25-6	SDF
Chemical Name	1-[6-(dimethylamino)-2-naphthalenyl]-1-dodecanone
Canonical SMILES	CN(C)C1=CC=C2C(C=CC(C(CCCCCCCCCCC)=O)=C2)=C1
Formula	C24H35NO	M.Wt	353.5
Solubility	Chloroform: 10 mg/ml,DMSO：5mg/ml	Storage	Store at -20°C,protect from light
General tips	Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time.
Shipping Condition	Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request.

Prepare stock solution
		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	2.8289 mL	14.1443 mL	28.2885 mL
	5 mM	565.8 μL	2.8289 mL	5.6577 mL
	10 mM	282.9 μL	1.4144 mL	2.8289 mL