M40

Lignées cellulaires

Méthode de préparation

Après avoir profondément anesthésié des rats néonatales, une craniotomie a été réalis, et le prosencéphale a été ablaté à la frontière caudale du pont par transection. Le tronc cérébral caudal et la moelle épinière cervicale ont été isolés par dissection dans une solution de krebs non-modifiée contenant 128.0mM NaCl, 3.0mM KCl, 0.5mM NaH₂PO₄, 1.5mM CaCl₂, 1.0mM MgSO₄, 21mM NaHCO₃, 1.0mM mannitol, 30.0mM glucose, et 10.0mM HEPES.

L'estomac, relié à l'oesophage par les nerfs vagos reliant celui-ci au tronc cérébral, a été conservé, et tous les autres organes internes ont été enlevés. La préparation a été ensuite isolée et épinquée, avec la surface dorsale vers le haut, sur une couche de résine Sylgard dans une chambre d'enregistrement. Une incision a été faite sur la surface latérale de la paroi gastrique pour minimiser les lésions éventuels aux fibres vagales gastriques. L'estomac a été ouvert et son contenu a été enlevé. Ensuite, l'estomac a été épinglé, et à la fois la muqueuse et la sérosa ont été exposées à la solution de Krebs dans le compartiment gastrique. La préparation a été perfusée à flux continu avec la solution de Krebs à 23±1℃. La solution de bain a été constamment aérée avec un mélange de 95% O₂ et 5% CO₂ et ajustée à pH de 7.35 à 7.45.

Les décharges unitaires toniques isolées ont été enregistrées de manière extracellulaire dans le sous-noyau médian de NTS au moyen de microélectrodes en verre remplies de NaCI 3M, avec une impédance de 10 à 20 MΩ . Un test de collision a été appliqué pour identifier les entrées orthodromiques afin de s'assurer qu'il n'y avait que des neurones de NTS de seconde ordre ou d'ordre supérieur dans le système afférent vagal gastrique. Les concentrations de galanine et de M40 utilisées dans l'expérience sont 100nM. Chaque composé testé a été d'abord dissous dans un petit volume de solution de Krebs. Ensuite, la solution concentrée a été appliqué au compartiment gastrique. La concentration finale du médicament dans le compartiment gastrique a été calculée en fonction de la quantité de solution concentrée et du volume total de Krebs dans le compartiment gastrique. La solution de médicament a été appliquée 5 minutes avant toute observation pharmacologique pour fournir suffisamment de temps pour que la livraison du médicament atteigne un niveau d'état stationnaire. Après chaque observation, le médicament a été éliminé du compartiment. Les réponses neuronales de NTS observées pendant l'essai préliminaire ou le pré-traitement (témoin) ont été comparées à celles post-essai (élimination) pour confirmer que l'activité neuronale du tronc cérébral revenait au niveau du témoin après élimination.

Conditions de réaction

Domaines d'application

Modèles animaux

Méthode de préparation

Les animaux ont été anesthésiés avec de l'uréthane (1.1g/kg) et immédiatement trachéotomisés. L'artère fémorale a été canulée avec un cathéter en plastique contenant de l'héparine (50IU/ml, 0.9% NaCl w/v) pour enregistrer la pression artérielle et la fréquence cardiaque, et l'animal a été placé dans un support stétéotaxique. La tête a été fléchie à 45°, les muscles du cou ont été disséqués avec un scalpel électrique pour éviter les saigenements et la membrane atlanto-occipitale a été exposée. La procédure chirurgicale a duré 8 - 10 minutes. Tout au long de l'expérience, la température corporelle a été maintenue à 37.5±0.5℃ au moyen d'une couverture thermostatique.

Pour étudier si M40 seul exerce un effet sur les paramètres cardiovasculaires centraux, des groupes de rats ont été injectés par voie intracisternale avec M40 à des doses de 1,0 nmol.

Forme de dosage

Domaines d'application

References:
[1] YUAN C S, DEY L, XIE J T, et al. Gastric effects of galanin and its interaction with leptin on brainstem neuronal activity [J]. The Journal of pharmacology and experimental therapeutics, 2002, 301(2): 488-93.
[2] NARVáEZ J A, DíAZ-CABIALE Z, HEDLUND P B, et al. The galanin receptor antagonist M40 blocks the central cardiovascular actions of the galanin N-terminal fragment (1-15) [J]. Eur J Pharmacol, 2000, 399(2-3): 197-203.