MQAE (Synonyms: MQAE) |
Catalog No.GC30035
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MQAE fonctionne en tant que capteur fluorescent d'extinction de l'ion chlorure (Cl−) non-ratiométrique, employé pour mesurer la concentration intracellulaire de Cl− ([Cl−]i), avec une longueur d'onde maximale d'excitation/émission(350/460nm).
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Cas No.: 162558-52-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
MQAE fonctionne en tant que capteur fluorescent d'extinction de l'ion chlorure (Cl−) non-ratiométrique, employé pour mesurer la concentration intracellulaire de Cl− ([Cl−]i), avec une longueur d'onde maximale d'excitation/émission(350/460nm)[1]. MQAE est adapté pour la microscopie de fluorescence de surface, la microscopie confocale, la microscopie à deux photons, la cytométrie en flux et d'autres expériences d'analyse biochimique[1-2]. L'intensité de fluorescence est diminuée lorsque la concentration de MQAE est diminuée et est augmentée lorsque la concentration de MQAE est augmentée, quelle que soit toute modification de [Cl−]i[2]. La distribution intracellulaire de MQAE n'est pas uniforme et n'est pas affectée par les changements de volume cellulaire causés par un stress osmotique[3]. MQAE peut se lier à des structures subcellulaires inconnues, et ces MQAE liés semblent permettre la mesure de [Cl−]i dans les cellules cliées respiratoires, même en présence de changements de volume cellulaire[1,4]. MQAE peut être utilisé pour créer une sonde pour la détection des ions chlorure mitochondriaux[5]. La fluorescence de la sonde à base de MQAE est insensible à pH dans la plage de pH physiologique et est éteinte par les ions chlorure, avec une constante d'extinction de Stern-Volmer de 201M-1 à pH 7.0[5].
References:
[1] Ikeuchi Y, Kogiso H, Hosogi S, et al. Measurement of [Cl−]i unaffected by the cell volume change using MQAE-based two-photon microscopy in airway ciliary cells of mice[J]. The journal of physiological sciences, 2018, 68: 191-199.
[2] Andersson C, Roomans G M. Determination of chloride efflux by X‐ray microanalysis versus MQAE‐fluorescence[J]. Microscopy research and technique, 2002, 59(6): 531-535.
[3] Koncz C, Daugirdas J T. Use of MQAE for measurement of intracellular [Cl−] in cultured aortic smooth muscle cells[J]. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology, 1994, 267(6): H2114-H2123.
[4] Miyazaki H, Shiozaki A, Niisato N, et al. Physiological significance of hypotonicity-induced regulatory volume decrease: reduction in intracellular Cl− concentration acting as an intracellular signaling[J]. American Journal of Physiology-Renal Physiology, 2007, 292(5): F1411-F1417.
[5] Park S H, Shin I, Kim Y H, et al. Mitochondrial Cl–-selective fluorescent probe for biological applications[J]. Analytical Chemistry, 2020, 92(18): 12116-12119.
Ce protocole fournit seulement une ligne directive et doit être modifié en fonction de vos besoins spécifiques.
1.Préparer la solution de coloration MQAE:
La solution de travail à 5-10mM MQAE est préparée dans un tampon Krebs-hepes (20mM HEPES, 128mM NaCl, 2.5mM KCl, 2.7mM CaCl2, 1mM MgCl2, 16mM glucose; pH 7.4). Après configuration, utilisez une membrane filtrante de 0,22µm pour filtrer et stériliser. Veuillez ajuster la concentration de la solution de travail MQAE en fonction de la situation réelle et utilisez-la immédiatement.
2.Coloration des cellules en suspension (protocole pour plaque à 6 puits)
(1)Pour les cellules en suspension:
Centrifuger la suspension cellulaire à 1000×g pendant 3-5 minutes et aspirer soigneusement le surnageant. Laver les cellules deux fois avec tampon Krebs-Hepes (5 minutes par lavage) avec centrifugation à 1000×g entre les lavages.
(2)Pour les cellules adhérentes :
Rincer les cellules adhérentes deux fois avec tampon Krebs-Hepes. Détacher les cellules à l'aide de trypsinisation, suivie d'une centrifugation à 1000×g pendant 3-5 minutes.
(3)Incubation du colorant :
Resuspendre le culot cellulaire dans 1mL de solution de travail du colorant. Incuber à la température ambiante pendant 30-60 minutes à l'obscurité (le temps d'incubation optimal peut varier en fonction du type de cellule).
(4)Traitement après l'incubation :
Centrifuger à 1000×g pendant 5 minutes et retirer soigneusement le surnageant. Laver les cellules 2-3 fois avec PBS (5 minutes par lavage) avec centrifugation entre les lavages.
(5)Resuspension et observation :
Resuspendre les cellules colorées dans un substrat sans sérum ou PBS. Procéder à l'examen microscopique.
3.Coloration des cellules adhérentes :
(1)Préparation de la culture cellulaire :
Cultiver les cellules adhérentes sur les lamelles de couverture stériles jusqu'à atteindre la confluence souhaitée.
(2)Traitement pré-coloration:
Retirer soigneusement le substrat et placer la lamelle de couverture dans une chambre humidifiée.
(3)Incubation du colorant:
Appliquer 100µL de solution de travail du colorant sur un bord de la lamelle de couverture et incliner doucement pour assurer une couverture uniforme de la monocouche cellulaire. Incuber à température de chambre pendant 30 - 60 minutes en obscurité.
(4)Lavages après la coloration:
Aspirez la solution de colorant et rincez la lamelle de couverture 2 - 3 fois avec PBS (5 minutes par lavage).
4.Analyse microscopique :
Examinez les cellules colorées soit au moyen de la microscopie de fluorescence, soit de la cytométrie en flux. MQAE exhibe unne excitation/émission maximale à 350/460nm.
References:
[1] Koncz C, Daugirdas J T. Use of MQAE for measurement of intracellular [Cl?] in cultured aortic smooth muscle cells[J]. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology, 1994, 267(6): H2114-H2123.
[2] Miyazaki H, Shiozaki A, Niisato N, et al. Physiological significance of hypotonicity-induced regulatory volume decrease: reduction in intracellular Cl? concentration acting as an intracellular signaling[J]. American Journal of Physiology-Renal Physiology, 2007, 292(5): F1411-F1417.
| Cas No. | 162558-52-3 | SDF | |
| Synonymes | MQAE | ||
| Canonical SMILES | COC1=CC2=CC=C[N+](CC(OCC)=O)=C2C=C1.[Br-] | ||
| Formula | C14H16BrNO3 | M.Wt | 326.19 |
| Solubility | DMSO : ≥ 35 mg/mL (107.30 mM) | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.0657 mL | 15.3285 mL | 30.657 mL |
| 5 mM | 613.1 μL | 3.0657 mL | 6.1314 mL |
| 10 mM | 306.6 μL | 1.5328 mL | 3.0657 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.50% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
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