APF |
カタログ番号GC42825
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APFは新型のROS指標であり、490/515nmという最大励起/発光波長で、溶液と細胞の一部の反応性酸素種に結合して、選択的に、用量依存的に蛍光を発光する。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 359010-70-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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APFは新型のROS指標であり、490/515nmという最大励起/発光波長で、溶液と細胞の一部の反応性酸素種に結合して、選択的に、用量依存的に蛍光を発光する。HDCFDAに比べて、APFの特異性と安定性はより高い。APFは細胞を透過でき、非蛍光的、ヒドロキシルラジカル、ペルオキシニトロソアニオン、または次亜塩素酸アニオンなどの反応性酸素種と反応し、強い緑色の蛍光を生産し、この蛍光は蛍光顕微鏡またはフローサイトメトリーで検出される。ヒドロキシルラジカル、ペルオキシニトロソアニオン、または次亜塩素酸アニオンと反応した後、APFは強い緑色の蛍光を生産し、この蛍光は蛍光顕微鏡、高スループットイメージャー、蛍光酵素電気泳動またはフローサイトメトリーで検出されることができる。同時に、様々な分子と結合させ、特定の標識検出を達成することもできる。これはバイオマーカー、細胞画像化と蛍光顕微鏡の分野で広く使われている[1]。
References:
[1]. Cohn C A, Pedigo C E, Hylton S N, et al. Evaluating the use of 3'-(p-Aminophenyl) fluorescein for determining the formation of highly reactive oxygen species in particle suspensions[J]. Geochemical Transactions, 2009, 10: 1-9.
下記のプログラムはあくまでも参考までであり、実際の使用はご自分の実験条件に合わせてご調整願います。
I.貯蔵液の調製
冷凍保存された1mgの粉末を室温で最短20分間再加温し、その後472μLの無水DMFを添加し、5mMの貯蔵液を形成する。十分な溶解と混合の後、各使用量に応じて調合し、光から避けて-20℃で保存し、繰り返した冷凍と解凍を避ける。
注：APFはDMSOでは可溶だが、一部のデータでは、DMSOがヒドロキシルラジカルの消光剤で、検出を干渉し、感受性を減らすことが示された。よって、DMSOを溶媒として使うことを推奨しない。
II.溶液システムテスト
正式な実験の前に、APF貯蔵液の一チューブを取り、室温に置き、完全に溶解させる。その後、適切な緩衝液（例えばHHBS緩衝液またはPBS緩衝液など）で溶液を希釈し、希望の作業溶液濃度にする。始まりの濃度を1-10μMにすることを推奨し、実際の濃度はご自分の実験システム、または文献を参照しご調整願います。
III.細胞システムアッセイ
1.スライドで細胞懸濁または生細胞を調製する。
2.DMF貯蔵液を適切な緩衝液に希釈し、推奨の開始濃度の範囲は1-10μMである。
3.細胞を希釈されたAPFで20-60分間、37℃で培養する。接着細胞はトリプシンの消化なしで培養することができる。
4.細胞を2-3回洗浄し、過剰のプローブ溶液を除去し、新鮮な緩衝液または培地に置き換える。
5.適切な蛍光装置を選び、Ex/Em: 490/515nmで検出する。
注：
1.ウシ血清アルブミン（BSA）とフェノールレッドは蛍光値に影響を与えるため、使用時は注意を払うべきである。
2.APFが生産した蛍光は、他の反応性酸素プローブ（例えばDCFH）と比べてとても弱く、プローブ自体の特徴に決められる。
References:
[1]. Flemmig J, Zschaler J, Remmler J, et al. The fluorescein-derived dye aminophenyl fluorescein is a suitable tool to detect hypobromous acid (HOBr)-producing activity in eosinophils[J]. Journal of Biological Chemistry, 2012, 287(33): 27913-27923.
[2]. Cohn C A, Pedigo C E, Hylton S N, et al. Evaluating the use of 3'-(p-Aminophenyl) fluorescein for determining the formation of highly reactive oxygen species in particle suspensions[J]. Geochemical Transactions, 2009, 10: 1-9.
| Cas No. | 359010-70-1 | SDF | |
| Canonical SMILES | Nc1ccc(cc1)Oc1ccc2c(c1)Oc1cc(O)ccc1C12OC(=O)c2ccccc12 | ||
| Formula | C26H17NO5 | M.Wt | 423.4 |
| 溶解度 | DMF: 20 mg/ml,DMSO: 10 mg/ml,Ethanol: 10 mg/ml,Ethanol:PBS (pH 7.2)(1:3): .5 mg/ml | Storage | Store at -20°C; protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.3618 mL | 11.8092 mL | 23.6183 mL |
| 5 mM | 472.4 μL | 2.3618 mL | 4.7237 mL |
| 10 mM | 236.2 μL | 1.1809 mL | 2.3618 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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