E 64d (Synonyms: Aloxistatin, E64c ethyl ester, EP 453, EST, Loxistatin, NSC 694281) |
カタログ番号GC13787
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E 64Dは、血小板凝集阻害活性を備えた細胞透過性、不可逆的、広範囲にわたるシステインプロテアーゼ阻害剤である。
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Cas No.: 88321-09-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
E 64Dは、血小板凝集阻害活性を備えた細胞透過性、不可逆的、広範囲にわたるシステインプロテアーゼ阻害剤である。それはエポキシドリングを含んでいる非選択的な共有組織プロテアーゼの阻害剤であるり、cys-shによって求的な攻撃を行い、触媒部位で共有結合を形成できる[2]。E 64DはIC50が0.5±0.11μmであるSCNB細胞におけるプロテアーゼの耐性プリオンタンパク質（PRP-RES）の蓄積を阻害する[3]。
体外では、E 64D（3µM）で３０分間のSH-SY5Yの前処理を行い、アミロイドβが誘発したSAPPαの分泌の低下を改善でき、セラミド誘発性タンパク質キナーゼＣのダウンレギュレーションが逆転する[4]。E 64D（25μM）で24時間のHT22細胞を治療することでGLUTAMATEが誘発したアポトーシスを緩和し、ミトコンドリア膜電位の減少を逆転させ、酸化ストレスの減少を低下する[5]。
体内では、E 64D（9mg/kg/日）が10日間関節炎鼠に腹腔内注射され、臨床関節炎および組織病理学の重症度が大幅に減少し、サイトカインIL-6およびIL-1βのmRNAレベルが低下する[6]。 E 64D（1mg/kg）はSCIによって引き起こされる炎症反応を阻害し、脊髄組織におけるカルレチニン1の発現を減少させ、神経酸素アポトーシスを減少させ、シクロオキシゲンゼ2の活性を阻害するためには脊髄損傷（SCI）のラットに静脈内注射される。
References:
[1] Chen Y, Li Q, Li Q, et al. p62/SQSTM1, a central but unexploited target: advances in its physiological/pathogenic functions and small molecular modulators[J]. Journal of medicinal chemistry, 2020, 63(18): 10135-10157.
[2] Cannalire R, Stefanelli I, Cerchia C, et al. SARS-CoV-2 entry inhibitors: small molecules and peptides targeting virus or host cells[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2020, 21(16): 5707.
[3] Doh-Ura K, Iwaki T, Caughey B. Lysosomotropic agents and cysteine protease inhibitors inhibit scrapie-associated prion protein accumulation[J]. Journal of virology, 2000, 74(10): 4894-4897.
[4] Tanabe F, Nakajima T, Ito M. The thiol proteinase inhibitor E-64-d ameliorates amyloid-β-induced reduction of sAPPα secretion by reversing ceramide-induced protein kinase C down-regulation in SH-SY5Y neuroblastoma cells[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2013, 441(1): 256-261.
[5] Xie R J, Li T X, Qiao X Y, et al. The Protective Role of E‐64d in Hippocampal Excitotoxic Neuronal Injury Induced by Glutamate in HT22 Hippocampal Neuronal Cells[J]. Neural Plasticity, 2021, 2021(1): 7174287.
[6] Yoshifuji H, Umehara H, Maruyama H, et al. Amelioration of experimental arthritis by a calpain-inhibitory compound: regulation of cytokine production by E-64-d in vivo and in vitro[J]. International immunology, 2005, 17(10): 1327-1336.
[7] Zhang Z, Huang Z, Dai H, et al. Therapeutic Efficacy of E‐64‐d, a Selective Calpain Inhibitor, in Experimental Acute Spinal Cord Injury[J]. BioMed Research International, 2015, 2015(1): 134242.
| 細胞実験[１]: | |
細胞株 | SH-SY5Y細胞 |
準備方法 | SH-SY5Y細胞をE 64D（3µM）で30分間前処理し、Aβ（0.001または0.01µm）と5.5Hでインキュベートし、続いてメタコリン（1mm）と2時間インキュベートする。分泌されたSAPPαは、6E10抗体を使用してウエスタンブロッティングによって分析される。 |
反応条件 | 3µM; 30分間 |
アプリケーション | E 64Dは、SH-SY5Y細胞のSAPPα分泌のAβ誘発性の減少を回復する。 |
| 動物実験 [２]: | |
動物モデル | BALB/c 鼠 |
準備方法 | 関節炎は、抗タイプII Cl MABとLPSの混合物を含んでいる7週齢の雌BALB/C鼠で誘導される。 mAb混合物の体ごとに2 mgを注入したi.p.各鼠に、そして48時間後に、LPSのボディあたり50µgがi.pを注入する。関節炎を促進するためである。 E 64D、組換えCal Pastatin（RCS）（9mg/kg/日）またはコントロール希釈液の高用量（9mg/kg/day）または低用量（3mg/kg/日）、I.P。 MABの注射前日から10日間、病気の影響を受けた鼠に。各体から右後足を除去し、各足の関節炎の重症度を巨視的に評価す。細胞浸潤、Pannusの形成、および骨侵食の所見に基づいて、組織病理学的重症度を評価できる。 |
投与形態 | 10日間3、9mg/kg/日; i.p. |
アプリケーション | 高用量のE 64Dグループの臨床関節炎スコアは未処理のグループの臨床スコアよりも有意に低いが、低用量のE 64DグループとRCSが処理したグループに改善はない。高用量E 64Dグループの細胞浸潤組織病理学的スコアと総組織病理学的関節炎スコアは未治療群のそれよりも有意に低い。 |
References: | |
| Cas No. | 88321-09-9 | SDF | |
| 同義語 | Aloxistatin, E64c ethyl ester, EP 453, EST, Loxistatin, NSC 694281 | ||
| Chemical Name | ethyl (2S,3S)-3-[[(2S)-4-methyl-1-(3-methylbutylamino)-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]oxirane-2-carboxylate | ||
| Canonical SMILES | CCOC(=O)C1C(O1)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NCCC(C)C | ||
| Formula | C17H30N2O5 | M.Wt | 342.43 |
| 溶解度 | ≥ 17.1215mg/mL in DMSO | Storage | Store at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.9203 mL | 14.6015 mL | 29.203 mL |
| 5 mM | 584.1 μL | 2.9203 mL | 5.8406 mL |
| 10 mM | 292 μL | 1.4602 mL | 2.9203 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
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- Purity: >99.50% Appearance: A solid
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