E 64d

E 64Dは、血小板凝集阻害活性を備えた細胞透過性、不可逆的、広範囲にわたるシステインプロテアーゼ阻害剤である。それはエポキシドリングを含んでいる非選択的な共有組織プロテアーゼの阻害剤であるり、cys-shによって求的な攻撃を行い、触媒部位で共有結合を形成できる[2]。E 64DはIC50が0.5±0.11μmであるSCNB細胞におけるプロテアーゼの耐性プリオンタンパク質（PRP-RES）の蓄積を阻害する[3]。

体外では、E 64D（3µM）で３０分間のSH-SY5Yの前処理を行い、アミロイドβが誘発したSAPPαの分泌の低下を改善でき、セラミド誘発性タンパク質キナーゼＣのダウンレギュレーションが逆転する[4]。E 64D（25μM）で24時間のHT22細胞を治療することでGLUTAMATEが誘発したアポトーシスを緩和し、ミトコンドリア膜電位の減少を逆転させ、酸化ストレスの減少を低下する[5]。

体内では、E 64D（9mg/kg/日）が10日間関節炎鼠に腹腔内注射され、臨床関節炎および組織病理学の重症度が大幅に減少し、サイトカインIL-6およびIL-1βのmRNAレベルが低下する[6]。 E 64D（1mg/kg）はSCIによって引き起こされる炎症反応を阻害し、脊髄組織におけるカルレチニン1の発現を減少させ、神経酸素アポトーシスを減少させ、シクロオキシゲンゼ2の活性を阻害するためには脊髄損傷（SCI）のラットに静脈内注射される。

References:
[1] Chen Y, Li Q, Li Q, et al. p62/SQSTM1, a central but unexploited target: advances in its physiological/pathogenic functions and small molecular modulators[J]. Journal of medicinal chemistry, 2020, 63(18): 10135-10157.
[2] Cannalire R, Stefanelli I, Cerchia C, et al. SARS-CoV-2 entry inhibitors: small molecules and peptides targeting virus or host cells[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2020, 21(16): 5707.
[3] Doh-Ura K, Iwaki T, Caughey B. Lysosomotropic agents and cysteine protease inhibitors inhibit scrapie-associated prion protein accumulation[J]. Journal of virology, 2000, 74(10): 4894-4897.
[4] Tanabe F, Nakajima T, Ito M. The thiol proteinase inhibitor E-64-d ameliorates amyloid-β-induced reduction of sAPPα secretion by reversing ceramide-induced protein kinase C down-regulation in SH-SY5Y neuroblastoma cells[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2013, 441(1): 256-261.
[5] Xie R J, Li T X, Qiao X Y, et al. The Protective Role of E‐64d in Hippocampal Excitotoxic Neuronal Injury Induced by Glutamate in HT22 Hippocampal Neuronal Cells[J]. Neural Plasticity, 2021, 2021(1): 7174287.
[6] Yoshifuji H, Umehara H, Maruyama H, et al. Amelioration of experimental arthritis by a calpain-inhibitory compound: regulation of cytokine production by E-64-d in vivo and in vitro[J]. International immunology, 2005, 17(10): 1327-1336.
[7] Zhang Z, Huang Z, Dai H, et al. Therapeutic Efficacy of E‐64‐d, a Selective Calpain Inhibitor, in Experimental Acute Spinal Cord Injury[J]. BioMed Research International, 2015, 2015(1): 134242.