SPDP (SPDP Crosslinker) |
カタログ番号GC30018
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SPDP (SPDP Crosslinker)は短鎖架橋剤であり、システインチオールでNHSエステル基とピリジルジスルフィド反応基と反応し、切断可能（還元可能）なジスルフィド結合を形成し、よってアミノとチオール基のカップリングを促進する。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 68181-17-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
SPDP (SPDP Crosslinker)は短鎖架橋剤であり、システインチオールでNHSエステル基とピリジルジスルフィド反応基と反応し、切断可能（還元可能）なジスルフィド結合を形成し、よってアミノとチオール基のカップリングを促進する。SPDPが遊離のチオールと反応する時、検出可能な副産物-2-メルカプトピリジンを放出し、343nmで2-メルカプトピリジンの放出を測定することで、反応の簡単な追跡を可能にする。SPDPを抗体薬剤混合物の合成に使われることができる。SPDP架橋剤は膜浸透可能であり、細胞内で架橋できる[1-6]。
References:
[1]. Singh V, Mavila AK, et,al. Effect of lysine residue modification of ovine luteinizing hormone by heterobifunctional crosslinking reagent SPDP on subunit-subunit association, receptor binding and biological activity. Indian J Exp Biol. 1992 Nov;30(11):1093-100. PMID: 1284055.
[2]. Lobedanz S, Bokma E et,al. A periplasmic coiled-coil interface underlying TolC recruitment and the assembly of bacterial drug efflux pumps. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Mar 13;104(11):4612-7. doi: 10.1073/pnas.0610160104. Epub 2007 Mar 5. PMID: 17360572; PMCID: PMC1838649.
[3]. Chen L, Xu N, et,al. Nanoalbumin-prodrug conjugates prepared via a thiolation-and-conjugation method improve cancer chemotherapy and immune checkpoint blockade therapy by promoting CD8+ T-cell infiltration. Bioeng Transl Med. 2022 Jul 30;8(1):e10377. doi: 10.1002/btm2.10377. PMID: 36684090; PMCID: PMC9842047.
[4]. Karumuthil-Melethil S, Perez N, et,al. Dendritic cell-directed CTLA-4 engagement during pancreatic beta cell antigen presentation delays type 1 diabetes. J Immunol. 2010 Jun 15;184(12):6695-708. doi: 10.4049/jimmunol.0903130. Epub 2010 May 14. PMID: 20483724; PMCID: PMC2882504.
[5]. Zhang D, Guo Y, et,al. Expression of a recombinant FLT3 ligand and its emtansine conjugate as a therapeutic candidate against acute myeloid leukemia cells with FLT3 expression. Microb Cell Fact. 2021 Mar 10;20(1):67. doi: 10.1186/s12934-021-01559-6. PMID: 33691697; PMCID: PMC7948335.
[6]. Zhao H, Li L, Peng Z, et,al. Improved targeting delivery of WED-load immunoliposomes modified with SP-A mAb for the treatment of pulmonary fibrosis. Colloids Surf B Biointerfaces. 2023 Apr;224:113237. doi: 10.1016/j.colsurfb.2023.113237. Epub 2023 Mar 1. PMID: 36871414.
SPDPを使ってのアルブミン複合体とNanoAlb-proDOX複合体の生成のプロトコール[1]:
1.HSAをPBS-EDTA緩衝液（20mMのリン酸ナトリウム、150mMのNaCl、1mMのEDTA、pH7.5）に、200μMの濃度に溶解する。
2.DMSOでSPDP貯蔵液を調製した。反応を始めるために、室温で、PBS-EDTA緩衝液で50μMのHSAと1mMのSPDPを2時間ゆっくり揺らした。
3.反応後、PD-10コラムをフローすることで、余分のSPDPを除去した。
4.その後、酢酸緩衝液の中の23mg/mlのDTT（100mMの酢酸ナトリウム緩衝液、100mMのNaCl、pH4.5）をPBS-EDTA緩衝液の中のSPDP-標識のHSAに添加し、HSAの最終濃度は約100μMにした（酢酸緩衝液とPBS-EDTA緩衝液の比率は1:2に維持され、よって反応系のpHを比較的に酸性に維持し、天然と細胞内ジスルフィド連結をDTT還元に影響されることを防ぐ）。
5.反応を室温で1時間行い、余分のDTTをPD-10コラムを通じて、フローで除去した。
6.その後、還元されたHSA溶液をPBS-EDTA緩衝液における100μMのアルドキソルビシン（AlDOX、全反応量の20%のDMSOで希釈）、最終HSA濃度が20μMで反応させた。混合物を室温でゆっくり一晩中振った。
7.最後に、余分のAlDOXを、PD-10コラムを通じて、フローで除去した。NanoAlb-proDOX溶液をPBS緩衝器で保存し、-80℃で保存した。
SPDPを使っての生体内架橋のプロトコール[2]:
1.培養物をOD600 0.8に成長させた。
2.サンプルを二回洗浄し、架橋緩衝液（20mM Na-phosphate, pH 7.5 /150mM NaCl /1mM EDTA）で7.5倍濃縮し、DMSOで、DMSOのみ、0.2mMのSPDP、または0.2mM LC-SPDPで30分間培養した。
3.2.5mM Tris·HCl (pH 7.4)で消光した後、細胞を収穫し、架橋緩衝液で2回洗浄した。
4.細胞膜を8Mの尿素、1%のTriton X-100、20mMのNa-phosphate (pH 7.5)で溶解した。
5.可溶化膜から50μlのNi-NTA樹脂で1時間培養することで、複合体を親和精製し、最初に10mMのイミダゾール、8Mの尿素、1%のトリトンX-100、20mMのリン酸ナトリウム（pH 7.0）で洗浄し、次に20mMのイミダゾール、1%のトリトンX-100、20mMのリン酸ナトリウム（pH 7.0）、0.5MのNaCl、0.1%のSDSで洗浄し、最後に30mMのイミダゾール、1%のトリトンX-100、20mMのリン酸ナトリウム（pH 7.5）、150mMのNaCl、20%のグリセロールで洗浄した。洗浄はそれぞれ3回ずつ実施した。
6.蛋白質を8Mの尿素、50mMのTris·HCl、2%のSDS、0.4Mのイミダゾール(pH 6.8)で溶出し、100mMのDTT（37℃で、30分間）で架橋剤を還元し、複合体から切断し、SDS/10% PAGEで分離した。
References:
[1]. Chen L, Xu N, et,al. Nanoalbumin-prodrug conjugates prepared via a thiolation-and-conjugation method improve cancer chemotherapy and immune checkpoint blockade therapy by promoting CD8+ T-cell infiltration. Bioeng Transl Med. 2022 Jul 30;8(1):e10377. doi: 10.1002/btm2.10377. PMID: 36684090; PMCID: PMC9842047.
[2]. Lobedanz S, Bokma E, et,al. A periplasmic coiled-coil interface underlying TolC recruitment and the assembly of bacterial drug efflux pumps. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Mar 13;104(11):4612-7. doi: 10.1073/pnas.0610160104. Epub 2007 Mar 5. PMID: 17360572; PMCID: PMC1838649.
| Cas No. | 68181-17-9 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C(ON1C(CCC1=O)=O)CCSSC2=NC=CC=C2 | ||
| Formula | C12H12N2O4S2 | M.Wt | 312.36 |
| 溶解度 | DMSO : 155 mg/mL (496.22 mM) | Storage | -20°C, protect from light, stored under nitrogen,unstable in solution, ready to use. |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2014 mL | 16.0072 mL | 32.0143 mL |
| 5 mM | 640.3 μL | 3.2014 mL | 6.4029 mL |
| 10 mM | 320.1 μL | 1.6007 mL | 3.2014 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >97.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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