5-BrdU (Synonyms: BrdU, Bromodeoxyuridine, Broxuridine, NSC 38297) |
| Katalog-Nr.GC11940 |
5-BrdU (5-bromo-2-deoxundine5-BrdU) ist ein synthetischer Thymidin- Boom-Analogen, das häufig zur Messung der DNA-Synthese un zum Markieren teilenden Zeilen verwendet wird.
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Cas No.: 59-14-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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5-BrdU (5-bromo-2-deoxundine5-BrdU) ist ein synthetischer Thymidin- Boom-Analogen, das häufig zur Messung der DNA-Synthese un zum Markieren teilenden Zeilen verwendet wird[1]. 5-BrdU kann sich during der S-Phase in das zelluläre DNA einbauen und dabei Thymidin substituieren, weshalb es zur Untersuchung von Signalwegen und anderer physiologischer Prozesse, die Zellproliferation auslösen, verwendet werden kann. [2]. 5-BrdU kann in vitro in Zellkultureb oder in vivo durch Injrktion appliziert und anschließend mittels anti-BdU -Antikörper spezifisch detektiert werden [3]. Nach der 5-BrdU-Markierung ist zusätzlich zu einer DNA-Denaturierungsstufe nach Fixierung und Permeabillisierung von Geweben oder Zellen erfordlich, um den 5-BrdU-Antikörper da Anbinden an in die DNA zu ermöglichen[4]. 5-BrdU-Antikörper können i Kombination mit anderen Zellmarkern wie Ki67, Doublecortin (DCX) and NeuN verwendet werden, um proliferierende Zellen und neu differenzierte Neuronen zu identifizieren[5].
References:
[1] Zhu H. Cell proliferation assay by flow cytometry (BrdU and PI staining)[J]. Bio-protocol, 2012: e198-e198.
[2] Ziv Y, Ron N, Butovsky O, et al. Immune cells contribute to the maintenance of neurogenesis and spatial learning abilities in adulthood[J]. Nature neuroscience, 2006, 9(2): 268-275.
[3] Matiašová A, Ševc J, Mikeš J, et al. Flow cytometric determination of 5-bromo-2ʹ-deoxyuridine pharmacokinetics in blood serum after intraperitoneal administration to rats and mice[J]. Histochemistry and cell biology, 2014, 142: 703-712.
[4] Wolter S, Dittmar F, Seifert R. cCMP and cUMP in apoptosis: concepts and methods[J]. Non-canonical Cyclic Nucleotides, 2017: 25-47.
[5] Diaz F. Characterization of the Neurogenic Response to Apoptosis of Cortical Glutamatergic Neurons in the Adult Brain[M]. Yeshiva University, 2013.
Der vorliegende Protocol bietet lediglich eine Richtlinie und sollte nach Ihren spezifischen Bedürfnissen angepasst werden.
1. Lösungspräparation
(1) Lagerlösung: Lösen Sie 5-BrdU Pulver in DMSO oder deionisiertem Wasser auf, um eine Endkonzentration von 10 mM zu erreichen, und filtrieren Sie steril.
Anmerkung: Nach dem Abfüllen der nicht verwendeten Lagerlösung speichern Sie sie an einem dunklen Ort bei -20℃, um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden.
(2) Arbeitslösung: Vor dem eigentlichen Versuch die Lagerlösung mit der Experimentierlösung auf die erforderliche Arbeitskonzentration zu verdünnen und filtrieren Sie steril.
Anmerkung: Bitte passen Sie die Arbeitskonzentration für eine spezifische Anwendung entsprechend der Situation an oder konsultieren Sie Literatur, um Konzentrationsgradienten selbst zu erstellen und die besten Bedingungen zu ermitteln. Die Arbeitslösung muss unmittelbar nach der Zubereitung verwendet werden.
2. In vitro Zellmarkierung mit 5-BrdU
(1) Wiegen Sie 3 mg 5-BrdU ab und lösen Sie es in 1 ml deionisierter Wasser vollständig auf. Zubereiten Sie eine 10 mM BrdU Lagerlösung. Verdünnen Sie die Lagerlösung mit Zellkulturmedium im Verhältnis 1:1000 auf eine 10 μM BrdU Färbungslösung und filtrieren Sie diese unter sterilen Bedingungen mit einem 0.2 μm Filter steril.
(2) Entfernen Sie das intrazelluläre Kulturmedium und ersetzen Sie es durch sterile 10 μM BrdU Färbungslösung, und inkubieren Sie in einem CO₂-Inkubator bei 37℃ für 1-24 Stunden.
(3) Entfernen Sie die intrazellulaire Farblösung und waschen Sie zweimal mit PBS, jeweils mindestens 5 Sekunden lang.
(4) Fixieren und permeabilisieren Sie die Zellen nach dem Standard-Immunocytochemistry (ICC) Verfahren. Bevor jedoch die Immunfärbung beginnt, konsultieren Sie die folgenden DNA-Denaturierungsschritte.
Anmerkung: Die Inkubationszeit für 5-BrdU hängt von der Zellteilungsrate ab. Primäre Zellen können bis zu 24 Stunden beanspruchen, aber schnell wachsende Zelllinien können nur 1 Stunde benötigen. Die optimale Zeit für das beste Signal-gegen-Störgeräusch-Verhältnis muss durch Bedingungensoptimierung bestimmt werden.
3. In vivo Markierung mit 5-BrdU
Es gibt viele Methoden zur in vivo Markierung mit 5-BrdU, und die am häufigsten verwendete ist die intraperitoneale Injektion. Folgende sind die Schritte für die intraperitoneale Injektion. Weitere Methoden können Literatur konsultiert oder nach Laborerfahrung durchgeführt werden.
(1) Lösen Sie einen geeigneten Mengen 5-BrdU in 1x PBS auf, um eine 10 mg/ml Lagerlösung zu erhalten, filtern und sterilisieren Sie, und frieren Sie sie in einzelhaften Aliquots ein, um später zu verwenden. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen.
(2) Für Mäuse ist die gewöhnlich verwendete Injektionskonzentration von 5-BrdU 100 mg/kg. Nach der Markierung werden die Tiere nach etablierten Laborverfahren behandelt.
Anmerkung: Das Eindringen von 5-BrdU in schnell differenzierende Gewebe wie dem Dünndarm kann bereits 30 Minuten nach der Injektion detektiert werden. Für meisten Gewebe jedoch kann es bis zu 24 Stunden dauern, bis es detektiert werden kann. Die angemessene Behandlungszeit und Injektionsdosis müssen anhand der Gewebeart optimiert werden.
4. DNA-Denaturierungsschritt
Zellprobe:
(1) Inkubieren Sie Zellen mit 1-2.5M HCl bei Raumtemperatur für 10 Minuten bis zu 1 Stunde. Die tatsächliche HCl-Konzentration und Inkubationszeit werden basierend auf dem Versuch optimiert. Wird eine kürzere Inkubationszeit verwendet, kann die Inkubation bei 37°C wirksamer sein als bei Raumtemperatur.
(2) Optionaler Schritt: Entfernen Sie das HCl und neutralisieren Sie mit 0.1M Natriumboratbuffer, pH 8.5 bei Raumtemperatur für 30 Minuten.
(3) Waschen Sie dreimal mit PBS, jeweils mindestens 5 Sekunden lang. Fortfahren Sie mit der Immunfärbung nach dem Standard-IHC-Verfahren.
Gewebschnitte:
(1) Entfernen Sie erst den Paraffin von den Schnitten.
(2) Inkubieren Sie die Schnitte mit 1-2.5M HCl bei Raumtemperatur für 30 Minuten bis zu 1 Stunde. Die tatsächliche HCl-Konzentration und Inkubationszeit werden nach dem Versuch optimiert. Wird eine kürzere Inkubationszeit verwendet, kann die Inkubation bei 37°C wirksamer sein als bei Raumtemperatur.
(3) Optionaler Schritt: Entfernen Sie das HCl und neutralisieren Sie die Schnitte mit 0.1M Natriumboratbuffer, pH 8.5 bei Raumtemperatur für 10 Minuten.
(4) Waschen Sie dreimal mit PBS, jeweils mindestens 5 Sekunden lang. Fortfahren Sie mit der Immunfärbung nach dem Standard-IHC-Verfahren.
Anmerkung: 5-BrdU ist eine Mutagen. Nehmen Sie during der Durchführung bitte Vorsichtsmaßnahmen und vermeiden Sie direkte Hautkontakt. Tragen Sie außerdem eine Maske, um Staubinhalationen zu vermeiden. Um Ihre Sicherheit und Gesundheit zu gewährleisten, tragen Sie bitte einen Labkittel und Einweghandschuhe.
| Cas No. | 59-14-3 | SDF | |
| Überlieferungen | BrdU, Bromodeoxyuridine, Broxuridine, NSC 38297 | ||
| Chemical Name | 5-bromo-1-((2R,4S,5R)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione | ||
| Canonical SMILES | BrC(C(N1)=O)=CN(C1=O)[C@@]2([H])C[C@@](O)([H])[C@@](O2)([H])CO | ||
| Formula | C9H11BrN2O5 | M.Wt | 307.1 |
| Löslichkeit | ≥ 15.35mg/mL in DMSO, ≥ 16.23 mg/mL in Water with ultrasonic, ≥ 11.56 mg/mL in 0.9% NS with ultrasonic | Storage | 4°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2563 mL | 16.2813 mL | 32.5627 mL |
| 5 mM | 0.6513 mL | 3.2563 mL | 6.5125 mL |
| 10 mM | 0.3256 mL | 1.6281 mL | 3.2563 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
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μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.50%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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