Orexin A (human, rat, mouse) |
Katalog-Nr.GC12522
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Orexin A (human, rat, mouse), orchestriert vielfätige zentrale und periphere Prozesse.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 205640-90-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Orexin A (human, rat, mouse), orchestriert vielfätige zentrale und periphere Prozesse. [1] Orexin A (human, rat, mouse) ist ein spezifischer, hochaffiner Agonist für den G-Protein-gekoppelten Rezeptor OX1R. Orexin A (human, rat, mouse) spielt eine Rolle bei der Regulation des Fressverhaltens. Orexin A (human, rat, mouse) ist ein wirksames Anti-Nozizeptivum bei Mäusen und Ratten[2]. Orexine binden zunächst OXRs, die wiederum mindestens drei Subtypen von G-Proteinen (Gq/1 Gl/o und Gs) oder andere Proteine (z. B. ß-Arrestin) aktivieren. Diese Efektoren regulieren anschließend Phospholipasen, lonenkanäle und Proteinkinasen und lösen schließlich die Aktivierung verschiedener nachgeschalteter Signalwege aus [3,5].
Orexin-A induzierte dosisabhängig einen vorübergehenden Anstieg von [Ca2+ ]i in CHO/OX1R-Zellen, induzierte jedoch keine nachweisbaren [Ca2+ ]i-Transienten in sibumiert transfizierten CHO-Zellen. Die Calciummobilisierung wird wahrscheinlich durch die Aktivierung der Gq-Klasse heterotrimerer G-Proteine verursacht[6]. Die berechnete Konzentration von Orexin-A, die zur Induktion des halbmaximalen Ansprechverhaltens (EC50) erforderlich ist, betrug 30 nM. Die Konzentration von unmarkiertem Orexin-A, die erforderlich war, um 50 % der spezifischen Radioligandenbindung (IC50) zu ersetzen, betrug 20 nM. Wiederholte kompetitive Radioliganden-Bindungsassays und [Ca2+ ]i transiente Dosis-Wirkungs-Studien mit stabil transfizierten CHO-Zellen, die die humane OX2R-cDNA exprimieren. Die Ergebnisse zeigten, dass OX2R tatsächlich ein hochaffiner Rezeptor für humanes Orexin-B ist, mit einem IC50 von 36 nM im Bindungsassay und einem EC50 von 60 nM im [Ca2+ ]i transienten Assay. Orexin-A hatte eine hohe Affinität zu diesem Rezeptor mit 38 nM IC50 und 24 nM EC50 Werten. Diese Ergebnisse bestätigen, dass Orexin-A tatsächlich ein spezifischer, hochaffiner Agonist für OX1R ist.
Die Orexin-A-Konzentration in der Zerebrospinalflüssigkeit (CSF) war bei sieben von neuen Patienten mit Narkolepsie ungewöhnlich niedrig, was darauf deutet, dass die Orexinübertragung bei diesen Patienten mangelhaft war[7]. In einer späteren Studie berichtete die gleiche Gruppe über einen dramatischen Abfall der Orexin-A-Spiegel im Liquor in 32 von 38 aufeinanderfolgenden Narkolepsie-Kataplexie-Fällen [8]. Auf der Basis dieser Ergebnisse kamen sie zu dem Ergebnis, dass Orexin in den meisten Fällen der menschlichen Narkolpsie mangelhaft it, was auf mögliche diagnostische Anwendungen hindeutet. Darüber hinaus ist die Anzahl der Orexin-Neuronen im LH von Patienten mit Narkolepsie um 85%-95% reduziert [9]. Orexin mRNA und Neuropeptid fehlen im Hypothalamus, Pons und Kortex von Narkolepsie-Patienten vollständig, und die sekretorische Signalsequenz des Orexin-Gens ist in den schwersten Fällen der früh eingesetzenden Narkolepsie mangelhaft [10]. Diese Beobachtungen belegen weiterhin, dass Narkolepsie mit einem Mangel im Orexin-System verbunden ist.
Die Bindung von Orexinen an Orexinrezeptor Typ 1 (OX1R) oder OX2R stimuliert Gq- oder Gi-Subtypen, die anschließend die Aktivierung von Phospholipase C (PLC), Phospholiüase A (PLA), Phospoholipase D (PLD) oder Adenylycylasen (AC) induzieren, was unumstößlich zu einer Erhöhung des zytosolischen Ca2+ und einer nachgeschalteten Kaskadenreaktion führt. Darüber hinaus bindet OA OX1R und erhöht Ca2+, indem es nichtselektive Kationenskanäle (NSCCs) aktiviert [11].
References:
[1]. Bingham S, et al. Orexin-A, an hypothalamic peptide with analgesic properties. Pain. 2001 May;92(1-2):81-90.
[2]. Sakurai T, et al. Orexins and orexin receptors: a family of hypothalamic neuropeptides and G protein-coupled receptors that regulate feeding behavior. Cell. 1998 Feb 20;92(4):573-85.
[3].Dalrymple M B, Jaeger W C, Eidne K A, et al. Temporal profiling of orexin receptor-arrestin-ubiquitin complexes reveals differences between receptor subtypes[J]. Journal of Biological Chemistry, 2011, 286(19): 16726-16733.
[4].Kukkonen J P, Leonard C S. Orexin/hypocretin receptor signalling cascades[J]. British journal of pharmacology, 2014, 171(2): 314-331.
[5].Leonard C S, Kukkonen J P. Orexin/hypocretin receptor signalling: a functional perspective[J]. British journal of pharmacology, 2014, 171(2): 294-313.
[6].Hepler J R, Kozasa T, Gilman A G. [16] Purification of recombinant Gqα, G11α, and G16α from Sf9 cells[M]//Methods in enzymology. Academic Press, 1994, 237: 191-212.
[7].Nishino S, Ripley B, Overeem S, et al. Hypocretin (orexin) deficiency in human narcolepsy[J]. The Lancet, 2000, 355(9197): 39-40.
[8].Nishino S, Ripley B, Overeem S, et al. Low cerebrospinal fluid hypocretin (Orexin) and altered energy homeostasis in human narcolepsy[J]. Annals of Neurology: Official Journal of the American Neurological Association and the Child Neurology Society, 2001, 50(3): 381-388.
[9].Thannickal T C, Moore R Y, Nienhuis R, et al. Reduced number of hypocretin neurons in human narcolepsy[J]. Neuron, 2000, 27(3): 469-474.
[10].Peyron C, Faraco J, Rogers W, et al. A mutation in a case of early onset narcolepsy and a generalized absence of hypocretin peptides in human narcoleptic brains[J]. Nature medicine, 2000, 6(9): 991-997.
[11].Wang C, Wang Q, Ji B, et al. The orexin/receptor system: molecular mechanism and therapeutic potential for neurological diseases[J]. Frontiers in molecular neuroscience, 2018, 11: 220.
| Zellexperiment [1]: | |
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Zelllinien |
HEK293- und CHO-K1-Zellen |
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Vorbereitungsmethode |
cDNAs in voller Länge, die für einzelne verwaiste GPCRs kodieren, wurden in den pCDN-Säugetierexpressionsvektor subkloniert. Diese Plamisde wurden einzeln in die 293-Zellen der menschlichen embryonalen Niere (HEK) transfiziert, und stabile transfektante Zelllinien wurden etabliert und aufrechterhalten. Für pharmakologische In-vitro-Bewertungen wurden CHO-K1-Zellen stabil mit humanen OX1R- und OX2R-Expressionsvektoren transfiziert, und transfizierte Zelllinien wurden beibehalten. |
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Reaktionsbedingungen |
3 nmol /30 nmol |
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Anwendungen |
Die Konzentration von Orexin-A, die zur Induktion des halbmaxinmalen Ansprechens (EC50) erforderlich ist, betrug 30 nM. Ähnliche Ergebnisse wurden bei der Radioligadenbindung und bei transienten HEK293-Zellen durchgeführt wurden. Orexin Ein Mensch, eine Ratte und eine Maus hat eine hohe Affinität zu OX1R mit 38 nM IC50- und 34 nM EC50-Werten im transienten [Ca2+]i-Assay. |
| Tierversuch [2]: | |
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Tiermodelle |
C57BL/6J Mäuse und OX1R+/+, OX1R-/-, OX2R+/+, OX2R-/- and OX1R-/-/OX2R-/- Mäuse |
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Vorbereitungsmethode |
Orexin A wurde intrazerebroventrikulär (ICV) injiziert: Die Mäuse wurden sanft fixiert, Injektoren mit einem Durchmesser von 0,15 mm (die über Schläuche mit den Hamilton-Spritzen verbunden waren) wurden in die Führungskanülen eingeführt und die Tiere wurden in einem käfig freigelassen. Anschließend wurde ein Gesamtvolumen von 0,3 µl Lösung mit 3 µg Orexin A mit einer Flussrate von 0,1 µl/Minuten injiziert, gesteuert von einer Mikroinflusionspumpe. |
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Dosierungsform |
0.3 µl Solution mit 3 µg orexin A /0.1 µl/Minuten |
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Anwendungen |
Orexin A wird spezifisch durch Almorexant gehemmt. Die beiden bekannten Orexinrezeptoren vermitteln die Schlafinduktion durch Almorexant und Orexin A-induzierte Fortbewegung. Die Aktivierung von OX2R vermittelt jedoch die Induktion der Fortbewegung durch Orexin A und der Antagonismus von OX2R ist ausreichend, um den Schlaf bei Mäusen zu fördern. |
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References: |
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| Cas No. | 205640-90-0 | SDF | |
| Canonical SMILES | CC[C@]([C@@](/N=C(O)/C/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/C/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/C/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O)/[C@](/N=C(O) | ||
| Formula | C152H243N47O44S4 | M.Wt | 3561.10 |
| Löslichkeit | DMSO: 3 mg/ml,DMSO:PBS (pH 7.2) (1:1): 0.5 mg/ml | Storage | Desiccate at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 280.8 μL | 1.4041 mL | 2.8081 mL |
| 5 mM | 56.2 μL | 280.8 μL | 561.6 μL |
| 10 mM | 28.1 μL | 140.4 μL | 280.8 μL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
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- SDS (Safety Data Sheet)
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