Ac4ManNAz
Ac4ManNAz（1,3,4,6-テトラ-O-アセチル-N-アジドアセチルアミノマンノース）はアジドの含んだ代謝性糖タンパク質標識試薬であり、細胞の標識、追跡とプロテオーム解析のためタンパク質を選択的に修飾することができる。Ac4ManNAzはクリック化学試薬であり、アジドグループを持ち、アルキン基を含む分子とCu(I)触媒アジド-アルキン環化付加（CuAAC）を起こせる。
製品は研究用途にのみ使用できます。人体には使用できません。患者への販売は行っておりません。
| Pack Size | Price | Availability | Quantity | Action |
|---|---|---|---|---|
| 5mg | $135.00 | In Stock | 1 | |
| 10mg | $216.00 | In Stock | 1 | |
| 25mg | $405.00 | In Stock | 1 |
引用文献 (Citations)
1 publications本製品を使用した研究者による文献製品説明 (Description)
Ac4ManNAz（1,3,4,6-テトラ-O-アセチル-N-アジドアセチルアミノマンノース）はアジドの含んだ代謝性糖タンパク質標識試薬であり、細胞の標識、追跡とプロテオーム解析のためタンパク質を選択的に修飾することができる[1, 2]。Ac4ManNAzはクリック化学試薬であり、アジドグループを持ち、アルキン基を含む分子とCu(I)触媒アジド-アルキン環化付加（CuAAC）を起こせる[3]。Ac4ManNAzはDBCOまたはBCN基の含む分子で環ひずみ駆動型アルキン-アジド付加環化(SPAAC)を起こせる[4]。
クリック化学は多目的に使用できる反応で、様々な混合物の合成に使用できる。事実上、全ての生物分子は、クリック化学法で蛍光染料、ビオチンなどの小分子で簡単に標識することができる。
クリック化学反応は二つの成分（アジドとアルキン（末端アセチレン））の間で行われる。アジドとアルキン基は天然の生物分子ではほとんど見られないので、この反応は極めて生体直交性と特定性を持っている。
References:
[1] Han S S, Lee D E, Shim H E, et al. Physiological effects of Ac4ManNAz and optimization of metabolic labeling for cell tracking[J]. Theranostics, 2017, 7(5):1164.
[2] Han S S, Shim H E, Park S J, et al. Safety and optimization of metabolic labeling of endothelial progenitor cells for tracking[J]. Scientific reports, 2018, 8(1): 13212.
[3] Singh M S, Chowdhury S, Koley S. Advances of azide-alkyne cycloaddition-click chemistry over the recent decade[J]. Tetrahedron, 2016, 72(35): 5257-5283.
[4] Vidyakina A A, Silonov S A, Govdi A I, et al. Key role of cycloalkyne nature in alkyne-dye reagents for enhanced specificity of intracellular imaging by bioorthogonal bioconjugation[J]. Organic & Biomolecular Chemistry, 2024.
実験プロトコル (Protocol)
下記のプロトコールは、GlpBioが生産したアジドを使ったアルキン修飾オリゴヌクレオチドまたはDNAの化学標識のものである。このプランはあくまでもガイドであり、お客様にはご自分のニーズに合わせてご調整ください。
1.下記の表を使い、クリック化学標識に必要な試薬の量を計算する。必要な貯蔵液を調製する（付録を参照）。
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試薬 |
混合物における最終濃度 |
貯蔵液の濃度 |
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アルキン修飾のオリゴヌクレオチド/DNA |
様々(20 — 200 uM) |
様々 |
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アジド |
1.5 x（オリゴヌクレオチド濃度） |
DMSOに10mM |
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DMSO |
50 vol % |
— |
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アスコルビン酸 |
0.5 mM |
水に5mM |
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Cu-TBTA複合体 |
0.5 mM |
55 vol %のDMSOに10mM |
1.耐圧バイアルでアルキン修飾のオリゴヌクレオチドまたはDNAを溶解する。
2.pH 7.0で2Mのトリエチルアンモニウム酢酸緩衝液を添加し、最終濃度を0.2Mにする。
3.DMSOを添加し、ボルテックスする。
4.アジド貯蔵液（DMSOに10mM）を入れ、ボルテックスする。
5.必要な量の5mMのアスコルビン酸貯蔵液を混合物に入れ、短くボルテックスする。
6.不活性ガスを30秒間吹き込んで溶液を脱気する。窒素、アルゴンとヘリウムは使える。
7.55%の中の10mMのCopper (II)-TBTA貯蔵液を混合物に必要な量で入れる。不活性ガスでバイアルをフラッシュし、蓋を閉める。
8.混合物を徹底的にボルテックスする。アジドの著しい沈殿量が観測されたら、バイアルを80℃で3分間加熱して、ボルテックスする。
9.室温で一晩中保存する。
10.アセトン（オリゴヌクレオチド用）またはエタノール（DNA用）で複合体を沈殿させる。徹底的に混合させ、-20℃で20分間保存する。
オリゴヌクレオチド混合物を沈殿する方法：混合物に、アセトン中の3%の過塩素酸リチウムを最小4倍の過剰量を加える(混合物の量が多い場合は、複数のバイアルに分ける)。
DNA混合物を沈殿する方法：混合物に酢酸ナトリウムを入れて、最終濃度を0.3Mにする；量が2.5倍のエタノール（また0.8倍のイソプロパノール）を添加する。
11.10000rpmで10分間遠心分離する。
12.上清を廃棄する。アセトン（1mL）でペレットを洗浄し、10000rpmで10分間遠心分離する。
13.上清を廃棄し、ペレットを乾かし、RP-HPLCまたはPAGEで混合物を精製する。
付録：クリック化学標識と結合に使われる試薬の貯蔵液の調製
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5mMのアスコルビン酸貯蔵液 |
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調製 |
18mgのアスコルビン酸を20mLの蒸留水に溶解する |
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保存 |
アスコルビン酸が空気に容易に酸化される。溶液は一日間安定する。新鮮な調製液を使う。 |
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55%のDMSOにある10mMのCopper (II)-TBTA貯蔵液 |
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調製 |
50 mgの硫酸銅(II)五水和物を10mLの蒸留水に溶解する。116mgのTBTAリガンドを11mLのDMSOに溶解し、二つの溶液を混合する。 |
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保存 |
室温で保存する。溶液は数年間安定する。 |
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2Mのトリエチルアンモニウム酢酸緩衝液、pH 7.0 |
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調製 |
2.78mLのトリエチルアミンを1.14mLの酢酸とともに混合して、10mLまで水を入れ、pHを7.0に調整する |
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保存 |
室温で保存する。溶液は数年間安定する。 |
製品資料 (Product Documents)
化学的性質 (Chemical Properties)
ストック溶液は、-80°Cで保存する場合は6か月以内、-20°Cで保存する場合は1か月以内に使用してください。
溶解性を高めるには、チューブを37°Cに温め、適切な時間超音波処理してください。
計算ツール (Calculators)モル濃度 / 希釈 / 分子量 / 単位変換 / in vivo製剤 / 溶解度
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