引用文献 (Citations)
1 publications本製品を使用した研究者による文献製品説明 (Description)
BAPTAは高Ca2+-選択性のキレート剤であり、多様な細胞機能におけるカルシウムの役割の分析に使われる[1-2]。Ca2+に対するBAPTAの親和性は、それぞれ、芳香環上の電子供与性置換基または電子供与性置換基で増強され、または弱化される。BAPTAへのCa2+の結合は細胞内では、pHに依存しない[3]。さらに、BAPTAは精製ヒト6-ホスホフルクト-2-キナーゼ/フルクトース-2,6-ビスホスファターゼ3(PFKFB3)活性を直接阻害できる[4]。
体外で、機械的損傷を受けたニューロンを10、20、または40μMのBAPTAで処理した結果、末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼdUTPニック末端標識(TUNEL)陽性細胞を用量依存的に減らし、最大の保護作用は40μMで観察された[5]。増加する濃度のBAPTA (0.1, 1と10mM)でHEK293T細胞を処理した結果、内因性カルシウム活性化塩素イオンチャネルANO6(TMEM16F)の開口確率を上昇させた[6]。BAPTA(0~10mM)は、Ca2+と独立して、用量依存的にホスホリパーゼC(PLC)の活性を阻害する[7]。
体内で、完全な脊髄損傷後、10mM BAPTAを雌BALB/cマウスの病変部位に塗布した結果、溶媒処理の対照群と比べ、体重とModified Basso Beattie Bresnahan (mBBB)スコアは、より高かった[4]。150mM BAPTAをボブテイルスキンクの体内リンパにイオン導入した結果、個々の自発耳音響放射(SOAE)のピーク周波数が低下し、回復するまでには1時間以上かかった[8]。
References:
[1] Saoudi Y, Rousseau B, Doussière J, et al. Calcium-independent cytoskeleton disassembly induced by BAPTA. Eur J Biochem. 2004;271(15):3255-3264.
[2] Tsien RY. New calcium indicators and buffers with high selectivity against magnesium and protons: design, synthesis, and properties of prototype structures. Biochemistry. 1980;19(11):2396-2404.
[3] Sneyers F, Speelman-Rooms F, Verhelst SHL, Bootman MD, Bultynck G. Cellular effects of BAPTA: Are they only about Ca2+ chelation?. Biochim Biophys Acta Mol Cell Res. 2024;1871(2):119589.
[4] Sneyers F, Kerkhofs M, Speelman-Rooms F, et al. Intracellular BAPTA directly inhibits PFKFB3, thereby impeding mTORC1-driven Mcl-1 translation and killing MCL-1-addicted cancer cells. Cell Death Dis. 2023;14(9):600.
[5] Kang KR, Kim J, Ryu B, et al. BAPTA, a calcium chelator, neuroprotects injured neurons in vitro and promotes motor recovery after spinal cord transection in vivo. CNS Neurosci Ther. 2021;27(8):919-929.
[6] Kolesnikov DO, Nomerovskaya MA, Grigorieva ER, et al. Calcium chelation independent effects of BAPTA on endogenous ANO6 channels in HEK293T cells. Biochem Biophys Res Commun. 2024;693:149378.
[7] Hardie RC. Inhibition of phospholipase C activity in Drosophila photoreceptors by 1,2-bis(2-aminophenoxy)ethane N,N,N',N'-tetraacetic acid (BAPTA) and di-bromo BAPTA. Cell Calcium. 2005;38(6):547-556.
[8] Manley GA, Kirk DL. BAPTA induces frequency shifts in vivo of spontaneous otoacoustic emissions of the bobtail lizard. Audiol Neurootol. 2005;10(5):248-257.
実験プロトコル (Protocol)
| キナーゼ実験 [1]: | |
準備方法 | 様々な濃度のBAPTA(範囲は1µMから1mM)の存在下で、ADPの生産を測定したのに基づき、細胞フリーの生物化学分析法を使い、組み換え、精製のヒト6-ホスホフルクト-2-キナーゼ/フルクトース-2,6-ビスホスファターゼ3(PFKFB3)のキナーゼ活性を測定した。 |
反応条件 | 1µM-1mM |
アプリケーション | BAPTAは、PFKFB3活性を直接阻害した。 |
| 細胞実験[2]: | |
細胞株 | ニューロン |
準備方法 | 物理的に損傷するニューロンについて、DPBSに沈んだ分化されたニューロンとともに、100mgのガラスビーズを混合した。プレートを3回ゆっくり振盪し、ビーズを細胞の上に転がらせた。DPBSとガラスビーズを吸引除去した。実験の前に、10μM, 20μMと40μMの最終濃度で、DMEM/F12で希釈することでBAPTAを調製した。調製された各BAPTA (BAPTA群)またはDPBS (溶媒対照群)を細胞でゆっくり処理した。その後、プレートを37℃、30分間培養し、BAPTAに損傷細胞を保護させた。このプロセス中に、模擬手術群を変化せず、特定の基質を処理しなかった。TrypLEと処理し、37℃でプレートを5分間培養することで、細胞を剥離した。最後に、細胞をDMEM/F12で採取した。 |
反応条件 | 10, 20と40μM;30分間 |
アプリケーション | BAPTA処理群で、5.3%の細胞はプレートから分離され、対して溶媒対照群では14.5%であった。SEM下で、溶媒対照群の中のニューロンはアポトーシス特性を示した。末端デオキシヌクレオチド転移酵素dUTPニック末端標識(TUNEL)陽性の細胞の数は、用量依存的に著しく減少し、40μMで、BAPTAの効率は最大に達した。 |
| 動物実験 [2]: | |
動物モデル | 雌のBALB/cマウス |
準備方法 | Zoletil (tiletamineとzolazepamの1:1複合薬)とxylazine (3:1 ratio, 1mL/kg)を使い、6週齢の雌のBALB/cマウスを麻酔した。T9レベルで、脊椎椎弓切除術を行った。処理については、DPBSに希釈された20μLの10mM BAPTAとDPBSを調製した。BAPTAまたはDPBSをピペットで完全切断スポットに滴下し、それぞれBAPTA群と溶媒対照群に配置した。筋肉と筋膜を縫合し、皮膚を閉じた。術後、脊髄損傷(SCI)後の最初の14日間で、追加の水と砕いたの食物を提供した。1日に3回、マウスの膀胱を手動で圧迫した。模擬手術群の動物には、脊髄損傷を除いて、同じ手術処置を行った。 |
投与形態 | 20μL、10mM;塗布 |
アプリケーション | BAPTA群におけるModified Basso Beattie Bresnahan (mBBB)スコアは、SCI後の3日目から、溶媒対照群のスコアよりも著しく高かった。BAPTA群の体重は、SCI後の23日目から、溶媒対照群のより著しく高かった。 |
References: | |
製品資料 (Product Documents)
化学的性質 (Chemical Properties)
ストック溶液は、-80°Cで保存する場合は6か月以内、-20°Cで保存する場合は1か月以内に使用してください。
溶解性を高めるには、チューブを37°Cに温め、適切な時間超音波処理してください。
計算ツール (Calculators)モル濃度 / 希釈 / 分子量 / 単位変換 / in vivo製剤 / 溶解度
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