Hoechst 33258 trihydrochloride (Synonyms: Bisbenzimide, HOE 33258, NSC 322921, Pibenzimol) |
| カタログ番号GC12187 |
Hoechst 33258三塩酸塩（Hoechst 33258 trihydrochloride）は、核酸染色剤Hoechst 33258の類似物であり、dsDNAに結合したあと、青色の蛍光を放出し、最大の励起/発光は350/461nmである。
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 23491-45-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
核酸染色剤のHoechst 33258三塩酸塩(Ex/Em: 350/461nm)は広く、dsDNAに結合したあと、青色の蛍光を放出する細胞通過性の核酸対比染色剤として使われる。核酸染色Hoechst 33258三塩酸塩は、細胞の計数、細胞周期分析と細胞複製など様々な研究に一般的に使われる。アポトーシス細胞における凝結核の識別には特に有用で、細胞周期研究のためのBrdU 染色との併用でも特に有用である。Hoechst 33258の作用はHoechst 33342とほぼ同じだが、浸透性がより低い。
Hoechst染料は、それらの発光スペクトルで変化を追跡することで、細胞の生存率を監視するにも有用である。AT選択性のあるマイナーグルーブ結合DNA染色剤として、Hoechst 染料はすべての核酸に結合できるが、GCリッチ鎖に比べて、ATリッチ二本鎖DNA鎖に対してより大きな蛍光増強を示す[1]。この特性は、染色体中のQバンドを特定する為に利用されてきた。Qバンドは、キナクリン染料で染色する場合、明るい蛍光を発光するAT塩基対が豊富な領域である[2]。
図：DNAに結合するHoechst 33258の蛍光励起と発光スペクトル
References:
[1]. Portugal J, Waring MJ. Assignment of DNA binding sites for 4′, 6-diamidine-2-phenylindole and bisbenzimide (Hoechst 33258). A comparative footprinting study. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Gene Structure and Expression. 1988 Feb 28;949(2):158-68.
[2]. Weisblum B, Haenssler E. Fluorometric properties of the bibenzimidazole derivative Hoechst 33258, a fluorescent probe specific for AT concentration in chromosomal DNA. Chromosoma. 1974 Sep;46(3):255-60.
このプランはあくまでもガイドであり、ご自分のニーズに合わせてご調整いただければ幸いです。
1.Hoechst染色溶液の調製
(1) Hoechst染料貯蔵液の調製：DMSOを使い固体を溶解し、10mg/mLのHoechst染料貯蔵液を調製する。
注：Hoechst貯蔵液は、繰り返した冷凍と解凍を避ける為に、小分けし、暗闇で-4°Cまたは-20°Cで保存することを推奨する。
(2) 作業溶液の調製：事前加温した無血清培地または緩衝液（HBSSまたはPBS）を使い、貯蔵液を希釈し、濃度が10μg/mLのHoechst作業溶液を調製する。
注：実際の条件に合わせてHoechst作業液の濃度を調整して、速やかに調製してください。
2. 細胞の染色
2.1 懸濁細胞（6ウェルのプレートを例に）
(1) 懸濁細胞を1000gで3-5分間遠心分離する。上清を廃棄し、PBSで毎回5分間、二回洗浄する。
(2) 1 mLのHoechst染料作業溶液を添加して、暗闇の中室温で5-10分間培養する。
(3) 培養後、1000gで5分間遠心分離し、上清を除去し、PBSを添加して、1回に5分間、2-3回洗浄する。
(4) 無血清培地またはPBSで細胞を再懸濁し、蛍光顕微鏡またはフローサイトメトリーで観察する。
2.2 接着細胞
(1) 無菌のカバーガラスで接着細胞を培養する。
(2) カバーガラスを培地から除去し、余分の培地を吸引し、カバーガラスを湿った環境で置く。
(3) 100μLのHoechst染料作業溶液をカバーガラスの一角から添加し、ゆっくり振り、染料が全ての細胞を均一にカバーさせる。室温で暗闇で5-15分間培養する。
(4) 染料作業溶液を吸引し、培養溶液でカバーガラスを2-3回洗浄し、蛍光顕微鏡で観察する。
3. 顕微鏡の検出：Hoechst 33258の励起/発光はそれぞれ365⁄458nmである。
注意事項：
①固定細胞または組織サンプルの染色については、固定のあと、濯ぐことで固定物を除去する；
②Hoechst 33258の染色は一般的に、その他の染色のあとに行われる。他の染色は必要がなければ、Hoechst 33258の染色は直接に行われる；
③蛍光の消光を遅らせるため、抗蛍光消光封入剤の使用を推奨する；
④蛍光染料はみな消光の問題があるため、光をできるだけ避けるべきである；
⑤Hoechst 33258は人体に対して刺激性を持つ。安全と健康の為に、実験中は白衣と使い捨て手袋を装着してください。
References:
[1]. K D Harshman, P B Dervan. Molecular recognition of B-DNA by Hoechst 33258. 1985 Jul 11;13(13):4825-35. doi: 10.1093/nar/13.13.4825.
| Cas No. | 23491-45-4 | SDF | |
| 同義語 | Bisbenzimide, HOE 33258, NSC 322921, Pibenzimol | ||
| Chemical Name | 4-(6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1H,1'H-[2,5'-bibenzo[d]imidazol]-2'(3'H)-ylidene)cyclohexa-2,5-dienone trihydrochloride | ||
| Canonical SMILES | CN1CCN(CC1)C2=CC3=C(C=C2)N=C(N3)C4=CC5=C(C=C4)N/C(N5)=C6C=CC(C=C/6)=O.Cl.Cl.Cl | ||
| Formula | C25H27Cl3N6O | M.Wt | 533.88 |
| 溶解度 | Water : ≥ 72.85 mg/mL (136.45 mM), DMSO : ≥100 mg/mL | Storage | 4°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.8731 mL | 9.3654 mL | 18.7308 mL |
| 5 mM | 0.3746 mL | 1.8731 mL | 3.7462 mL |
| 10 mM | 0.1873 mL | 0.9365 mL | 1.8731 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 30 reference(s) in Google Scholar.)
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