JC-1 (Synonyms: CBIC2;JC1;JC 1) |
Catalog No.GC12331 |
JC-1(CBIC2)은 양이온성 카본릴 사이안 형광 염료이다.
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Cas No.: 3520-43-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
JC-1(CBIC2)은 양이온성 카본릴 사이안 형광 염료이다. JC-1은 선명한 빛을 발산하는 우수한 형광 프로브로 미토콘드리아 전기 잠력의 탐지에 널리 사용된다. 이는 미토콘드리아으로 선택적으로 들어가고 미토콘드리아 전기 잠재력의 변화에 따라 빛의 성질을 변화시키고 세포, 조직 또는 순수 미토콘드리아의 전기 잠력을 평가할 수 있다. 건강한 미토콘드리아에서는 JC-1이 미토콘드리아 매트릭스 내에서 집단을 형성하여 강렬한 빨간색 빛을 발산한다 (Ex=585 nm, Em=590 nm). 반대로 미토콘드리아 전기 잠력이 낮은 조건에서는 JC-1이 매트릭스 내에서 집단을 형성하지 못하여 녹색 형광을 발산한다 (Ex=514 nm, Em=529 nm) [1-4].
JC-1은 형광 분자이자 P- glycoprotein (Pgp)의 프로브이다. JC-1의 특성 중 하나는 액정 형태로 쌓이는 덕분에 그의 농도에 따라 형광 방출 파장이 달라진다. 490nm에서 자극하면 JC-1 단자는 537nm(초록색 밴드)를 중심으로 한 셀룰러 빛을 발산한다. 임계 농도를 넘어서면 JC-1은 멤브레인 내에서 집단을 형성하여 597nm(빨간색 밴드)를 중심으로 한 강렬한 발산 밴드가 나타나는 셀룰러 초록색 밴드와 함께 나타난다. 우리는 세포 라인에서 민감한 세포는 초록색과 빨간색 빛을 모두 보여주었다. 내성 세포에서는 Pgp 활동이 증가할 때 JC-1의 초록색 빛이 줄어들고 빨간색 빛이 사라진다. 중간 내성 세포에서는 초록색 빛의 강도가 민감한 세포의 빛의 강도와 종종 동일하지만 빨간색 빛은 이미 사라졌다 [5-7].
References:
[1]. Perelman A, Wachtel C, et,al. JC-1: alternative excitation wavelengths facilitate mitochondrial membrane potential cytometry. Cell Death Dis. 2012 Nov 22;3(11):e430. doi: 10.1038/cddis.2012.171. PMID: 23171850; PMCID: PMC3542606.
[2]. Chazotte B. Labeling mitochondria with JC-1. Cold Spring Harb Protoc. 2011 Sep 1;2011(9):pdb.prot065490. doi: 10.1101/pdb.prot065490. PMID: 21880824.
[3]. Armon-Omer A, Neuman H, et,al.Mitochondrial activity is impaired in lymphocytes of MS patients in correlation with disease severity. Mult Scler Relat Disord. 2020 Jun;41:102025. doi: 10.1016/j.msard.2020.102025. Epub 2020 Feb 25. PMID: 32146432.
[4]. Gravance CG, Garner DL, et,al. Assessment of equine sperm mitochondrial function using JC-1. Theriogenology. 2000 Jun;53(9):1691-703. doi: 10.1016/s0093-691x(00)00308-3. PMID: 10968415.
[5].Legrand O, Perrot JY, et,al. JC-1: a very sensitive fluorescent probe to test Pgp activity in adult acute myeloid leukemia. Blood. 2001 Jan 15;97(2):502-8. doi: 10.1182/blood.v97.2.502. PMID: 11154229.
[6]. Kühnel JM, Perrot JY, et,al. Functional assay of multidrug resistant cells using JC-1, a carbocyanine fluorescent probe. Leukemia. 1997 Jul;11(7):1147-55. doi: 10.1038/sj.leu.2400698. PMID: 9205004.
[7].Smiley ST, Reers M, et,al. Intracellular heterogeneity in mitochondrial membrane potentials revealed by a J-aggregate-forming lipophilic cation JC-1. Proc Natl Acad Sci U S A. 1991 May 1;88(9):3671-5. doi: 10.1073/pnas.88.9.3671. PMID: 2023917; PMCID: PMC51514.
미토콘드리아 전기 잠력 세포 실험 프로토콜 [1]:
1.DMSO에서 5mg/mL의 JC-1 보충 용액 (약 7.7 mM)을 준비하십시오. JC-1은 빛에 민감하므로 직접적인 강한 빛에 노출하지 마십시오. 모든 염색 과정은 조용한 조명에서 진행하십시오. JC-1 보충 용액을 반복해서 동결/해동하지 마십시오. 처음 해동 후 소량으로 나누어 -20℃에서 보관하십시오.
2.유리 커버리지 슬립을 사용하여 페트리 접시나 챔버 슬라이드에 세포를 재배양하십시오. 특정 프로토콜에 따라 세포를 유도하십시오.
3.신선한 배양액을 37℃로 데우십시오. JC-1 보충 용액의 소량을 실온에서 해동하십시오. JC-1을 완전히 해동하고 실온으로 데우기 전에 희석하지 마십시오. 희석 전에 해동된 JC-1을 충분히 섞습니다. 시약을 예열한 배양액에 재료를 희석하여 JC-1 염색 용액을 준비하십시오. 접착 세포의 염색에 대해서는JC-1을 배양액에 희석하여 최종 농도가 약 5 ug/mL이 되도록 하십시오 (희석 중 와류 (vortex)로 침전물의 형성을 막하십시오). 모든 입자를 용해하기 위해 잘 혼합하십시오. 재료를 중심 분리하지 마십시오. 사용하기 직전에 JC-1 재료를 즉시 희석합니다.
4. 세포 배양액을 제거하고 충분한 농도를 조정한 1X JC-1 재료로 바꾸어 세포를 덮도록 하십시오.
5.37℃에서 (또는 실온에서 15분 동안) 세포를 10분 동안 배양하십시오. 염색 시간은 세포 유형에 따라 다릅니다.
6.배양액을 제거하고 PBS나 신선한 배양액으로 단층 세포를 두 번 세척합니다.
7.PBS 한방울을 떨어뜨리고 커버슬립으로 세포를 덮으십시오.
8.살아있는 비세포사뇨 세포에서는 JC-1 재료가 집단화하여 멤브레인이 빨간색으로 나타납니다. 빨간색 집단은 약 590nm에서 발산합니다. 사멸하고 죽은 세포에서는 염료가 단체 형태로 남아 약 530nm에서 발산하는 녹색으로 나타납니다. 이를 위해 동시에 플루오레신과 로다민 또는 플루오레신과 텍사스 레드를 감지할 수 있는 이중 밴드 통과 필터가 설계된 퓨어스센트 현미경으로 세포를 즉시 관찰하십시오.
P- glycoprotein (Pgp) 기능 평가 JC-1의 실험 프로토콜 [2]:
1.염색 시 세포를 두 번 씻은 후 0.1 μM JC-1 단자를 포함한 PBS에서 모노 머 세포 농도를 5×105 세포/mL로 하고 37℃에서 15분 동안 배양하고 Pgp 기능을 평가하기 위해 조절제를 추가하거나 추가하지 않습니다.
2. 차가운 PBS로 세포를 두 번 씻은 후 샘플을 분석합니다.
3.488-nm 아르곤 레이저와 3개의 퓨어스센트 탐지기(FL1: 530-nm 밴드 패스 필터, FL2: 585-nm 밴드 패스 필터, FL3: 650 nm 밴드 패스 필터)가 장착된 FACSort 흐름 사이토메트리를 사용하여 세포 퓨어스센트를 기록합니다.
4.FL1 및 FL2 채널에서 JC-1 형광체를 분석하여 염료 단체 및 액정 형태의 퓨어스센트를 탐지합니다. 원시 세포는 CD34 항체로 선택하거나 원시 세포가 특성 표식을 표현하지 않을 때에는 물리적 특성만으로 Pgp 기능을 확립합니다.
이 프로토콜은 가이드라인을 제공할 뿐이고 구체적인 필요에 따라 수정되어야 합니다.
참조 문헌:
[1]. Perelman A, Wachtel C, et,al. JC-1: alternative excitation wavelengths facilitate mitochondrial membrane potential cytometry. Cell Death Dis. 2012 Nov 22;3(11):e430. doi: 10.1038/cddis.2012.171. PMID: 23171850; PMCID: PMC3542606.
[2]. Legrand O, Perrot JY, et,al. JC-1: a very sensitive fluorescent probe to test Pgp activity in adult acute myeloid leukemia. Blood. 2001 Jan 15;97(2):502-8. doi: 10.1182/blood.v97.2.502. PMID: 11154229.
Cas No. | 3520-43-2 | SDF | |
Synonyms | CBIC2;JC1;JC 1 | ||
Chemical Name | 5,6-dichloro-2-[(E)-3-(5,6-dichloro-1,3-diethylbenzimidazol-3-ium-2-yl)prop-2-enylidene]-1,3-diethylbenzimidazole;iodide | ||
Canonical SMILES | CCN1C2=CC(=C(C=C2[N+](=C1C=CC=C3N(C4=CC(=C(C=C4N3CC)Cl)Cl)CC)CC)Cl)Cl.[I-] | ||
Formula | C25H27Cl4IN4 | M.Wt | 652.23 |
Solubility | ≥ 32.6 mg/mL in DMSO with gentle warming | Storage | Store at -20°C,protect from light |
General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. |
Prepare stock solution | |||
![]() |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
1 mM | 1.5332 mL | 7.666 mL | 15.332 mL |
5 mM | 0.3066 mL | 1.5332 mL | 3.0664 mL |
10 mM | 0.1533 mL | 0.7666 mL | 1.5332 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
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- Purity: >99.00%
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