JC-1 (Synonyms: CBIC2;JC1;JC 1) |
Katalog-Nr.GC12331
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JC-1(CBIC2) ist ein kationische Carbonylcyanin-Fluoreszenzfarbstoff.
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Cas No.: 3520-43-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
JC-1(CBIC2) ist ein kationische Carbonylcyanin-Fluoreszenzfarbstoff. JC-1 dient als hervorragende Fluoreszenzsonde und wird oft zur Bestimmung des mitochondrialen Membranpotentials eingesetzt. Es dringt selektiv in die Mitochondrien ein und ändert seine Fluoreszen zeigenschaften mit Änderungen des mitochondrialen Transmembranpotentials(ΔΨ m). Und das ermöglicht die Bestimmung des Membranpotentials in Zellen, Geweben oder gereinigten Mitochondrien. In gesunden Mitochondrien bildet JC-1 Aggregate innerhalb der mitochondrialen Matrix. Das führt zu intensiver roter Fluoreszenz(Ex=585 nm, Em=590 nm). Umgekehrt aggregiert JC-1 unter Bedingungen niedrigen mitochondrialen Membranpotentials nicht in der Matrix. Das führt zur Emission grüner Fluoreszenz(Ex=514 nm, Em=529 nm)[1-4].
JC-1, ein fluoreszierendes Molekül, ist auch eine Sonde für P-glycoprotein (Pgp). Eine besondere Eigenschaft von JC-1 aufgrund seiner Stapelung in Flüssigkristallform ist die Abhängigkeit der Wellenlänge seiner Fluoreszenzemission von seiner Konzentration. Bei Anregung mit 490 nm zeigen JC-1-Monomere eine zytoplasmatische Fluoreszenzemission mit dem Zentrum bei 537 nm(grünes Band). Oberhalb einer kritischen Konzentration aggregiert JC-1 mit Mitochondrium. Dadurch entsteht ein intensives Emissionsband mit dem Zentrum bei 597 nm(rotes Band), zusätzlich zum zytoplasmatischen grünen Band. Wir haben in Zelllinien gezeigt, dass empfindliche Zellen sowohl grüne als auch rote Fluoreszenz aufweisen. In resistenten Zellen nahm die grüne Fluoreszenz von JC-1 mit zunehmender Pgp-Aktivität ab und die rote Fluoreszenz ging verloren. In mittelresistenten Zellen war die Intensität der grünen Fluoreszenz oft identisch mit der Fluoreszenzintensität empfindlicher Zellen, die rote Fluoreszenz war aber bereits verloren[5-7].
References:
[1]. Perelman A, Wachtel C, et,al. JC-1: alternative excitation wavelengths facilitate mitochondrial membrane potential cytometry. Cell Death Dis. 2012 Nov 22;3(11):e430. doi: 10.1038/cddis.2012.171. PMID: 23171850; PMCID: PMC3542606.
[2]. Chazotte B. Labeling mitochondria with JC-1. Cold Spring Harb Protoc. 2011 Sep 1;2011(9):pdb.prot065490. doi: 10.1101/pdb.prot065490. PMID: 21880824.
[3]. Armon-Omer A, Neuman H, et,al.Mitochondrial activity is impaired in lymphocytes of MS patients in correlation with disease severity. Mult Scler Relat Disord. 2020 Jun;41:102025. doi: 10.1016/j.msard.2020.102025. Epub 2020 Feb 25. PMID: 32146432.
[4]. Gravance CG, Garner DL, et,al. Assessment of equine sperm mitochondrial function using JC-1. Theriogenology. 2000 Jun;53(9):1691-703. doi: 10.1016/s0093-691x(00)00308-3. PMID: 10968415.
[5].Legrand O, Perrot JY, et,al. JC-1: a very sensitive fluorescent probe to test Pgp activity in adult acute myeloid leukemia. Blood. 2001 Jan 15;97(2):502-8. doi: 10.1182/blood.v97.2.502. PMID: 11154229.
[6]. Kühnel JM, Perrot JY, et,al. Functional assay of multidrug resistant cells using JC-1, a carbocyanine fluorescent probe. Leukemia. 1997 Jul;11(7):1147-55. doi: 10.1038/sj.leu.2400698. PMID: 9205004.
[7].Smiley ST, Reers M, et,al. Intracellular heterogeneity in mitochondrial membrane potentials revealed by a J-aggregate-forming lipophilic cation JC-1. Proc Natl Acad Sci U S A. 1991 May 1;88(9):3671-5. doi: 10.1073/pnas.88.9.3671. PMID: 2023917; PMCID: PMC51514.
Protokoll für den Zelltest des mitochondrialen Membranpotentials[1]:
1.Bereiten Sie eine 5 mg/mL Stammlösung von JC-1 in DMSO(~7.7 mM) vor. JC-1 ist lichtempfindlich. Setzen Sie es keinem direkten, intensiven Licht aus. Führen Sie alle Färbevorgänge bei gedämpftem Licht durch. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren/Auftauen der JC-1-Stammlösung. Bereiten Sie nach dem ersten Auftauen kleine Aliquots vor und lagern Sie sie bei -20℃.
2.Züchten Sie die Zellen auf einem Deckglas in einer Petrischale oder einem Kammerschieber. Induzieren Sie die Zellen gemäß Ihrem spezifischen Protokoll.
3.Erwärmen Sie frisches Kulturmedium auf 37℃. Tauen Sie ein Aliquot der JC-1-Stammlösung bei Raumtemperatur(RT) auf. Stellen Sie sicher, dass JC-1 vor dem Verdünnen vollständig aufgetaut und auf RT erwärmt ist. Mischen Sie aufgetautes JC-1 vor dem Verdünnen gut durch. Bereiten Sie die JC-1-Färbelösung vor, dadurch dass Sie das Reagenz in vorgewärmtem Kulturmedium verdünnen. Zur Färbung adhärenter Zellen wird JC-1 im Medium auf eine Endkonzentration von ~ 5 ug/mL verdünnt(während der Verdünnung vortexen, um Niederschlagsbildung zu vermeiden). Mischen Sie gut, um alle Partikel aufzulösen. Zentrifugieren Sie das Reagenz nicht. Verdünnen Sie JC-1-Reagenz unmittelbar vor Gebrauch.
4.Das Zellkulturmedium entfernen und durch ausreichend verdünntes 1X JC-1-Reagenz ersetzen, um die Zellen zu bedecken.
5.Die Zellen 10 Minuten bei 37℃ (oder RT für 15 Minuten) inkubieren. Die Dauer der Färbung hängt vom Zelltyp ab.
6.Das Medium entfernen und die Monoschicht zweimal mit PBS oder frischem Medium waschen.
7.Einen Tropfen PBS hinzufügen und die Zellen mit einem Deckglas abdecken.
8.Beobachten Sie die Zellen sofort mit einem Fluoreszenzmikroskop. Verwenden Sie dazu einen Dual-Bandpassfilter, der Fluorescein, Rhodamin oder Fluorescein und Texas Red gleichzeitig erkennt. In lebenden, nicht-apoptotischen Zellen erscheinen die Mitochondrien nach der Aggregation des JC-1-Reagenzes rot. Die roten Aggregate emittieren bei etwa 590 nm. In apoptotischen und toten Zellen verbleibt der Farbstoff in seiner monomeren Form und erscheint grün mit einer Emission bei etwa 530 nm.
Protokoll für den Funktionstest JC-1 für P-glycoprotein(Pgp) [2]:
1.Zur Färbung wurden die Zellen zweimal gewaschen und in PBS mit 0.1 μM JC-1 JC-1-Monomer in einer Konzentration von 5x105 Zellen/mL resuspendiert. Zur Beurteilung der Pgp-Funktion wurden sie 15 Minuten lang bei 37℃ mit oder ohne Modulator inkubiert.
2.Die Zellen wurden zweimal in kaltem PBS gwaschen und die Proben analysiert.
3.Die Zellfluoreszenz wurde mit einem FACSort-Durchflusszytometer mit einem 488-nm-Argonlaser und drei Fluoreszenzdetektoren aufgezeichnet: FL1 (530-nm-Bandpassfilter), FL2 (585-nm-Bandpassfilter) und FL3 (650-nm-Bandpassfilter).
4.Die JC-1-Fluoreszenzen wurden auf den Kanälen FL1 und FL2 analysiert, um die Fluoreszenz des Farbstoffmonomers bzw. der Flüssigkristallform zu erfassen. Die Funktion von Pgp wurde anhand von durch CD34-Antikörper selektierten Blastenzellen oder anhand physikalischer Merkmale nachgewiesen, sofern die Blastenzellen keine charakteristischen Marker exprimierten.
Das Protokoll dient nur als Richtlinie und sollte an Ihre spezifischen Bedürfnisse angepasst werden.
References:
[1]. Perelman A, Wachtel C, et,al. JC-1: alternative excitation wavelengths facilitate mitochondrial membrane potential cytometry. Cell Death Dis. 2012 Nov 22;3(11):e430. doi: 10.1038/cddis.2012.171. PMID: 23171850; PMCID: PMC3542606.
[2]. Legrand O, Perrot JY, et,al. JC-1: a very sensitive fluorescent probe to test Pgp activity in adult acute myeloid leukemia. Blood. 2001 Jan 15;97(2):502-8. doi: 10.1182/blood.v97.2.502. PMID: 11154229.
| Cas No. | 3520-43-2 | SDF | |
| Überlieferungen | CBIC2;JC1;JC 1 | ||
| Chemical Name | 5,6-dichloro-2-[(E)-3-(5,6-dichloro-1,3-diethylbenzimidazol-3-ium-2-yl)prop-2-enylidene]-1,3-diethylbenzimidazole;iodide | ||
| Canonical SMILES | CCN1C2=CC(=C(C=C2[N+](=C1C=CC=C3N(C4=CC(=C(C=C4N3CC)Cl)Cl)CC)CC)Cl)Cl.[I-] | ||
| Formula | C25H27Cl4IN4 | M.Wt | 652.23 |
| Löslichkeit | ≥ 32.6 mg/mL in DMSO with gentle warming | Storage | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.5332 mL | 7.666 mL | 15.332 mL |
| 5 mM | 306.6 μL | 1.5332 mL | 3.0664 mL |
| 10 mM | 153.3 μL | 766.6 μL | 1.5332 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
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