C12FDG (Synonyms: 5-Dodecanoylaminofluorescein di-β-D-Galactopyranoside) |
| Katalog-Nr.GC43021 |
C12FDG ist das fluoreszierende Substrat der ß-Galactosidase.
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Cas No.: 138777-25-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
C12FDG ist das fluoreszierende Substrat der ß-Galactosidase. Durch die Enzymolyse der ß-Galactosidase wird Fluorescein freigesetzt und seine Gluoreszenz kann zur Quantifizierung der Aktivität der ß-Galacosidase verwendet werden. Die Anregungs-/Emissionsmaxima von Fluorescein liegen bei 485/530 nm[1-3].
C12FDG(15 μM ; 2 Stunden)-Färbung kann die SA-ß-Gal-Aktivität zum Nachweis der Seneszenz in THP-1-Zellen (15 μM ; 2 Stunden) [4] und A172-Zellen (90 Minuten; 33 µM) [5] beurteilen. Die Messung der Seneszenz-assoziierten ß-Galactosidase (SA-ß-Gal)-Aktivität unter Verwendung des Fluoreszenzsubstrats C12FDG in Kombination mit der Bestimmung der Gesamtzellzahl mittels eines DNA-interkalierenden Hoeschst-Farbstoffs eröffnet die Möglichkeit, auf senotherapeutische Arzneimittel zu untersuchen [6].
References:
[1]. Zhang YZ, Naleway JJ, et,al. Detecting lacZ gene expression in living cells with new lipophilic, fluorogenic beta-galactosidase substrates. FASEB J. 1991 Dec;5(15):3108-13. doi: 10.1096/fasebj.5.15.1720751. PMID: 1720751.
[2]. Plovins A, Alvarez AM, et,al. Use of fluorescein-di-beta-D-galactopyranoside (FDG) and C12-FDG as substrates for beta-galactosidase detection by flow cytometry in animal, bacterial, and yeast cells. Appl Environ Microbiol. 1994 Dec;60(12):4638-41. doi: 10.1128/aem.60.12.4638-4641.1994. PMID: 7811104; PMCID: PMC202038.
[3]. Fuhrmann-Stroissnigg H, Santiago FE, et,al. SA-β-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs. J Vis Exp. 2019 Jun 28;(148). doi: 10.3791/58133. PMID: 31305507.
[4]. Díaz M, Pibuel M, et,al. 4-Methylumbelliferone induces antitumor effects independently of hyaluronan synthesis inhibition in human acute leukemia cell lines. Life Sci. 2021 Dec 15;287:120065. doi: 10.1016/j.lfs.2021.120065. Epub 2021 Oct 19. PMID: 34678263.
[5]. Beltzig L, Frumkina A, et,al. Cytotoxic, Genotoxic and Senolytic Potential of Native and Micellar Curcumin. Nutrients. 2021 Jul 13;13(7):2385. doi: 10.3390/nu13072385. PMID: 34371895; PMCID: PMC8308652.
[6].Waltz RA, Whitney KE, et,al. A Systemic and Local Comparison of Senescence in an Acute Anterior Cruciate Ligament Injury-A Pilot Case Series. Life (Basel). 2023 Jul 15;13(7):1567. doi: 10.3390/life13071567. PMID: 37511942; PMCID: PMC10381817.
Protokoll für das Experiment mit fluoreszierender Alterung in Verbindung mit ß-Galactosidase (SA-ß-Gal) unter Verwendung von C12FDG [1]:
1.Die Zellen wurden mit einer Dichte von 105 Zellen /ml kultiviert.
2.Die Zellen wurden einmal mit 200 μL PBS gewaschen und dann mit 100 μL Fixerlösung (2% Formaldehyd / 0.2% Glutaraldehyd destilliertes Wasser) bei Raumtemperatur für 5 Minuten fixiert.
3.Die Zellen wurden zweimal mit 200 μL PBS gewaschen, 10 Minuten lang mit 200 μl Hoechst-Lösung (1 μg/mL Hoechst 33342) auf PBS (pH 6,0) gefärbt.
4.Diese Zellen wurden mit einer 20×Objektivlinse und Anregungsfiltern von 360 nm (Hoechst 33342) und 480 nm (C12FDG) abgebildet und mit Emissionsfiltern von 460 nm bzw. 535 nm überwacht.
Dieses Protokoll stellt nur eine Richtlinie dar und sollte entsprechend Ihren spezifischen Bedürfnissen geändert werden.
Protokoll zur Messung der Seneszenz-assoziierten ß-Galactosidase-Aktivität mit G12FDG [2]:
Das fluorogene zellpermeable Substrat C12FDG wurde verwendet, um die Sneszenz-assoziierte ß-Galactosidase-Aktivität (SA-β-gal) in behandelten Endothelzellen mittels Durchflusszytometrie zu bestimmen.
1.Endothelzellen (ECs) wurden 1 Stunde lang mit Chloroquin (300 μM) alkalisiert (pH 6), gefolgt von einer 1-stündigen Inkubation mit C12FDG (33 μM), einem fluorogenen Substrat von SA-ß-Gal.
2. Danach wurden die Zellen mit eiskaltem PBS gewaschen, mit Trypsin geerntet und mit der CellQuest-Software frisch analysiert. Die Lichtstreuparameter wurden eingestellt, um abgestorbene Zellen und subzelluläre Trümmer zu eliminieren.
3. Das grüne C12-Flurorescein-Signal wurde gemssen und die SA-ß-Gal-Aktivität anhand der mittleren Fluoreszenzintensität (MFI) der Zellpopulation geschätzt.
References:
[1]. Udono M, Kadooka K, et,al. Quantitative analysis of cellular senescence phenotypes using an imaging cytometer. Methods. 2012 Mar;56(3):383-8. doi: 10.1016/j.ymeth.2012.02.012. Epub 2012 Mar 3. PMID: 22406489.
[2]. Qureshi AW, Altamimy R, et,al. Ageing enhances the shedding of splenocyte microvesicles with endothelial pro-senescent effect that is prevented by a short-term intake of omega-3 PUFA EPA:DHA 6:1. Biochem Pharmacol. 2020 Mar;173:113734. doi: 10.1016/j.bcp.2019.113734. Epub 2019 Dec 5. PMID: 31811867.
| Cas No. | 138777-25-0 | SDF | |
| Überlieferungen | 5-Dodecanoylaminofluorescein di-β-D-Galactopyranoside | ||
| Chemical Name | N-[3',6'-bis(β-D-galactopyranosyloxy)-3-oxospiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthen]-5-yl]-dodecanamide | ||
| Canonical SMILES | O[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@H](O)[C@@H]1OC2=CC=C(C3(C4=CC=C(NC(CCCCCCCCCCC)=O)C=C4C(O3)=O)C(C=CC(O[C@@H]5O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)=C6)=C6O7)C7=C2 | ||
| Formula | C44H55NO16 | M.Wt | 853.9 |
| Löslichkeit | DMSO : 50 mg/mL (58.55 mM; Need ultrasonic) | Storage | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.1711 mL | 5.8555 mL | 11.711 mL |
| 5 mM | 234.2 μL | 1.1711 mL | 2.3422 mL |
| 10 mM | 117.1 μL | 585.5 μL | 1.1711 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
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- Purity: >98.00%
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- SDS (Safety Data Sheet)
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