X-Gal (Synonyms: BCIG, X-β-Gal, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-Galactopyranoside) |
Katalog-Nr.GC15620
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X-Gal wird durch ß-Galactosidase blau hydrolysiert, daher wird es häufig in transgenen Screening-Tests verwendet, wie z. B. dem Blau-Weiß-Spot-Screening oder dem In-situ-Färbeassay für ß-Galactosidase.
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Cas No.: 7240-90-6
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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X-Gal wird durch ß-Galactosidase blau hydrolysiert, daher wird es häufig in transgenen Screening-Tests verwendet, wie z. B. dem Blau-Weiß-Spot-Screening oder dem In-situ-Färbeassay für ß-Galactosidase [1-2].
X-gal (1 mg/ml / 0.3 mg/ml) wird auch zur Analyse des Proteinexpressionsmusters verwendet. Es kann verwendet werden, um das Expressionsmuster von Beta-Galactosidase in vivo zu detektieren [3-4]. X-gal (1 mg/ml) kann auch verwendet werden, um die LacZ-Aktivität in Mausembryonen und adulten Mäusen sichtbar zu machen[5-6].
References:
[1]. Green MR, Sambrook J. Screening Bacterial Colonies Using X-Gal and IPTG: α-Complementation. Cold Spring Harb Protoc. 2019 Dec 2;2019(12). doi: 10.1101/pdb.prot101329. PMID: 31792144.
[2]. Trimborn L, Hoecker U,et,al. A Simple Quantitative Assay for Measuring β-Galactosidase Activity Using X-Gal in Yeast-Based Interaction Analyses. Curr Protoc. 2022 May;2(5):e421. doi: 10.1002/cpz1.421. PMID: 35567769.
[3]. Kokubu H, Lim J. X-gal Staining on Adult Mouse Brain Sections. Bio Protoc. 2014;4(5):e1064. doi: 10.21769/bioprotoc.1064. Epub 2014 Mar 5. PMID: 27390760; PMCID: PMC4932900.
[4]. Burn SF. Detection of β-galactosidase activity: X-gal staining. Methods Mol Biol. 2012;886:241-50. doi: 10.1007/978-1-61779-851-1_21. PMID: 22639266.
[5]. Watanabe-Takano H, Fukumoto M, et,al. Protocol for whole-mount X-gal staining combined with tissue clearing in embryo and adult mouse using CUBIC. STAR Protoc. 2022 Jan 20;3(1):101127. doi: 10.1016/j.xpro.2022.101127. PMID: 35118431; PMCID: PMC8792446.
[6]. Gierut JJ, Jacks TE, et,al. Whole-mount X-Gal staining of mouse tissues. Cold Spring Harb Protoc. 2014 Apr 1;2014(4):417-9. doi: 10.1101/pdb.prot073452. PMID: 24692489; PMCID: PMC4169236.
Protokoll für die X-Gal-Speicherkonfiguration:
X-Gal-Lagerungskonfiguration: 20 mg/ml Lagerlösung, die durch Auflösen von X-Gal mit Dimethylformamid hergestellt wird. Wiegen 20 g X-Gal, fügen 1 l Dimethylformamid (DMF) hinzu, lösen es auf und bewahren es in einer Flasche auf, die in Alufolie eingewickelt ist, um Lichtschäden zu vermeiden, und sollte bei -20°C gelagert werden. Die X-Gal-Lösung erfordert keine Filtration, um Bakterien zu entfernen.
Protokoll für die X-Gal-Färbung an Schnitten aus adulten Mausgehirnen [1]:
1. Die Maus wird 5 Minuten lang mit PBS perfundiert, gefolgt von weiteren 5 Minuten mit 4% PFA/PBS postfixiert.
2. Das Gehirn der Maus wird präpariert und 4 Stunden lang bei 4°C mit 4% PFA/PBS postfixiert.
3. Das fixierte Gehirn wird zunächst dreimal mit PBS gewaschen. Anschließend wird es über Nacht (oder bis zum Absinken der Proben) mit 20% Saccharose und dann über Nacht mit 30% Saccharose inkubiert. Dieser Prozess hilft bei der Kryoprotektion und Vorbereitung des Gehirngewebes für die Kryosektion.
4. Das Gehirn wird in O.C.T.-Verbindung auf einem Kryomold montiert und bis zur Verwendung bei -80°C gelagert. 5. Der 40 μm Cyro-Schnitt wird mit einem Kryostaten hergestellt und auf das Objektträgerglas montiert.
6. Der Objektträger wird einmal mit einem 150 ml Färbepuffer für 10 Minuten bei Raumtemperatur gewaschen.
7. Der Objektträger wird mit 5 mM Kaliumferricyanid und 5 mM Kaliumferrocyanid bei 37°C inkubiert, bis sich die Farbe entwickelt. Dies dauert in der Regel 3 Stunden bis über Nacht. Stellen sicher, dass die Proben nicht austrocknen, und verwenden 100-200 μl X-gal-Lösung pro Objektträger.
8. Der Objektträger wird mit einer Reihe von Ethanollösungen (50%, 75%, 90%, 100%, 2 Minuten) dehydriert.
9. Die Rutsche wird mit permount montiert und kann bei Raumtemperatur gelagert werden. Die Probe ist nun bereit für die Bildgebung bei höherer Vergrößerung.
Referenz:
[1]. Kokubu H, Lim J. X-gal-Färbung auf Schnitten des Gehirns adulter Mäuse. Bio Protoc. 2014;4(5):e1064. doi: 10.21769/BioProtoc.1064. Epub 5. März 2014. PMID: 27390760; PMCID: PMC4932900.
| Cas No. | 7240-90-6 | SDF | |
| Überlieferungen | BCIG, X-β-Gal, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-Galactopyranoside | ||
| Chemical Name | (2S,3R,4S,5R,6R)-2-[(5-bromo-4-chloro-1H-indol-3-yl)oxy]-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol | ||
| Canonical SMILES | C1=CC(=C(C2=C1NC=C2OC3C(C(C(C(O3)CO)O)O)O)Cl)Br | ||
| Formula | C14H15BrCINO6 | M.Wt | 408.63 |
| Löslichkeit | ≥ 109.4 mg/mL in DMSO, ≥ 3.7 mg/mL in EtOH with ultrasonic and warming | Storage | store at -20°C,protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.4472 mL | 12.236 mL | 24.472 mL |
| 5 mM | 489.4 μL | 2.4472 mL | 4.8944 mL |
| 10 mM | 244.7 μL | 1.2236 mL | 2.4472 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL saline, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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