3X FLAG Peptide
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| Catalog No.GP10149 |
3X FLAG Peptide는 DYKXXD 아미노산 시퀀스를 세 번 반복한 합성 폴리펩타이드로, 일반적으로 앤티플래그 항체와 경쟁적으로 결합하는 데 사용된다.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 402750-12-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
- Sci Adv 11.2 (2025)：eadr7943.PMID:39792683
- Gene Dev (2024).PMID:38503515
- Gene Dev 33.19-20 (2019)：1397-1415.PMID:31467087
- Cell Rep 39.10 (2022).PMID:35675778
- EMBO Rep (2023)：e56834.PMID:37306046
- NPJ Precis Oncol 7.1 (2023)：33.PMID:36966223
- J Biol Chem 299.2 (2023).PMID:36621624
- Viruses 13.10 (2021)：1980.PMID:34696410
- Drug Metab Dispos 51.10 (2023)：1342-1349.
- bioRxiv (2022)：2022-09.
- Method Enzymol.Vol.673.Academic Press,2022.191-225.
3X FLAG Peptide는 DYKXXD 아미노산 시퀀스를 세 번 반복한 합성 폴리펩타이드로, 일반적으로 앤티플래그 항체와 경쟁적으로 결합하는 데 사용된다. 3X FLAG Peptide는 주로 단백질의 식별 및 정화에 사용되며, 예를 들어 면역순환중에 앤티플래그 항체에 결합된 플래그 퓨전 단백질을 엽입시키는 데 사용된다[1-5].
References:
[1]. Hopp, T., Prickett, K., et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Nat Biotechnol 6, 1204-1210 (1988). https://doi.org/10.1038/nbt1088-1204
[2]. Einhauer A, Jungbauer A. Affinity of the monoclonal antibody M1 directed against the FLAG peptide. J Chromatogr A. 2001 Jun 29;921(1):25-30. doi: 10.1016/s0021-9673(01)00831-7. PMID: 11461009.
[3].Gao XK, Rao XS, et al. Phase separation of insulin receptor substrate 1 drives the formation of insulin/IGF-1 signalosomes. Cell Discov. 2022 Jun 28;8(1):60. doi: 10.1038/s41421-022-00426-x. PMID: 35764611; PMCID: PMC9240053.
[4].Gao J, Huang G, et al.PROTEIN S-ACYL TRANSFERASE 13/16 modulate disease resistance by S-acylation of the nucleotide binding, leucine-rich repeat protein R5L1 in Arabidopsis. J Integr Plant Biol. 2022 Sep;64(9):1789-1802. doi: 10.1111/jipb.13324. Epub 2022 Jul 28. PMID: 35778928.
[5]. Lian H, Jiang K, et al.The Salmonella effector protein SopD targets Rab8 to positively and negatively modulate the inflammatory response. Nat Microbiol. 2021 May;6(5):658-671. doi: 10.1038/s41564-021-00866-3. Epub 2021 Feb 18. PMID: 33603205; PMCID: PMC8085087.
3×FLAG 펩타이드에 의한 단백질 발현 및 정제 프로토콜 [1]:
1. FLAG 태그가 붙은 유전자 플러스미드가 293T 세포에 2일 동안 전달되었습니다.
2. 세포는 4℃에서 14,000 rpm로 10분간 센트리파우징하여 수집되었으며 HEPES 버퍼 (150 mM 나트륨 염화물, 50 mM HEPES, pH 7.4, 5 mM EDTA, 1% (w/v) 소다 데옥시콜로아테 1% (v/v) 트리톤 X-100, 0.2% 나트륨 플루오라이드, 0.1% 나트륨 오스바나댐 및 프로테아아제 억제제 칵테일)로 균질화되었습니다.
3. 그 후에 반-FLAG M2 갠 주사체를 추가하고 4℃의 회전 쉐이커에서 2시간 동안 흡착시켰습니다. M2 갠 주사는 3,000 rpm로 1분 동안 센트리파우징하여 수집되었고 HEPES 버퍼에서 네 번 세척했습니다.
4. FLAG 태그 단백질은 3×FLAG펩타이드의 경쟁을 통하여 정제되었습니다. 즉, M2 앤들은 1.5 mg/mL의 3×FLAG 펩타이드 버퍼로 재흡수되어 4℃에서 2시간 동안 흡착시켰습니다.
5. 5,000 rpm에서 1분간 센트리파우징한 후 상청은 SuperdexTM 200 증가 컬럼을 사용하여 균류를 통한 갤 필트레이션으로 더욱 더 정제되었습니다, 이 컬럼은 저장 버퍼(50 mM Tris-HCl, 37 mM NaCI, 1 mM EDTA, 5 mM DTT)에서 균형을 이루고 있었습니다.
6. 모든 정제된 단백질들은 센트리필트레이션을 통하여 농축되었으며 -80℃에서 분할하여 보관되었습니다.
7. 정제된 단백질은 ND-2000 나노드롭 스펙트로포터미터를 사용하여 OD 280으로 농도를 측정하고 쿠마시 염색을 통해 확인되었습니다.
이 프로토콜은 가이드라인을 제공할 뿐이며 사용자의 특정 요구에 따라 수정해야 합니다.
3×FLAG 펩타이드 [2]를 이용한 Co-IP 및 co-IP-MS 분석을 위한 프로토콜:
1. 세포 라이세이트는 4℃에서 13,300 r.p.m의 속도로 15분간 센트리파우징하여 완전한 세포를 제거하였습니다.
2. 상청액은 IP 버퍼(150 mM NaCl, 20 mM HEPES pH 7.4, 1% 트리톤 X-100, 12.5 mM β-glycerophosphate, 1.5 mM MgCl2, 2 mM EGTA 및 단백질 분해효소 및 프로테아아제 억제제)에서 제어면역구획 단백질 G(IgG) 또는 기본 항체와 함께 밤새 흡착 후 4℃에서 2시간 동안 20 μl의 재흡수 용액의 프로틴 A/G 젠드와 흡착하여 결합된 단백질을 끌어들였습니다.
3. 연속 면역구획을 위해 결합된 단백질은 4℃에서 3×FLAG 펩타이드 엽출 용액(최종 농도 150 ng/ml)의 5배의 갠량으로 2시간 동안 흡착하여 젠드에서 엽출시켰으며 그 다음 4℃에서 밤새 제2 항체와 면역구획을 진행하였습니다.
4. 젠드는 4℃에서 1,000g의 속도로 5분간 원심분리하여 상청을 제거하고 IP 버퍼로 4번 세척한 후 95℃에서 20분간 끓였습니다. 샘플은 SDS-PAGE 젤에서 실행된 후Coomassie Brilliant Blue R-250 염색에 사용되었습니다.
5. 그 후 젤 밴드는 제거 탈색, 트립신 처리되어 MS 분석에 제출되었고 MS 분석 을 사용하여 개별 단백질을 식별했습니다.
이 프로토콜은 가이드라인만 제공하며 특정 요구 사항에 따라 수정되어야 합니다.
참조 문헌:
[1]. Gao XK, Rao XS, et al. Phase separation of insulin receptor substrate 1 drives the formation of insulin/IGF-1 signalosomes. Cell Discov. 2022 Jun 28;8(1):60. doi: 10.1038/s41421-022-00426-x. PMID: 35764611; PMCID: PMC9240053.
[2]. Cong M, Wang Y, et al. MTSS1 suppresses mammary tumor-initiating cells by enhancing RBCK1-mediated p65 ubiquitination. Nat Cancer. 2020 Feb;1(2):222-234. doi: 10.1038/s43018-019-0021-y. Epub 2020 Jan 20. PMID: 35122005.
| Cas No. | 402750-12-3 | SDF | |
| Synonyms | H-Met-Asp-Tyr-Lys-Asp-His-Asp-Gly-Asp-Tyr-Lys-Asp-His-Asp-Ile-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH | ||
| Chemical Name | 3X FLAG Peptide | ||
| Canonical SMILES | CCC(C)C(C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CC(=O)O)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)O)NC(=O)C(CC(=O)O)NC(=O)C(CC2=CNC=N2)NC(=O)C(CC(=O)O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(CC3=CC=C(C=C3)O)NC(=O)C(CC(=O)O)NC( | ||
| Formula | C120H169N31O49S | M.Wt | 2861.87 |
| Solubility | ≥143.1mg/mL in DMSO, <14.35mg/mL in EtOH, ≥143.4mg/mL in Water with gentle warming | Storage | Desiccate at -20°C |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 0.3494 mL | 1.7471 mL | 3.4942 mL |
| 5 mM | 0.0699 mL | 0.3494 mL | 0.6988 mL |
| 10 mM | 0.0349 mL | 0.1747 mL | 0.3494 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 29 reference(s) in Google Scholar.)
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